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Publié parJacqueline Germain Modifié depuis plus de 8 années
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Antibiogramme par diffusion en milieu gélosé (méthode des disques
Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Concentration Minimale Inhibitrice
Notion de CMI Concentration Minimale Inhibitrice plus faible concentration en antibiotique capable d’inhiber in vitro toute croissance visible de la bactérie étudiée. Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Détermination de la CMI
Volume rejeté : 0,5 mL Volume reporté (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Antibiotique 400 mg/L (mL) 0,5 Bouillon MH (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Inoculum bactérien (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 C ATB (mg/L) 100 50 25 12.5 6.25 3.125 Incubation Résultats
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Principe de l’antibiogramme par diffusion
Disque antibiotique(6mm) Charge connue Inoculation par étalement en surface de la gélose CMI CMI Culture Culture Gélose Mueller Hinton (4mm) Zone d’inhibition de la culture Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Gradient de diffusion et zone d’inhibition
Zone d’inhibition de la culture Gradient d’antibiotique décroissant Disque d’antibiotique Colonies C1 C2 C3 C4 C1 > C2 > C3 > C4 Diamètre d’inhibition Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
Résultats Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Evolution du gradient dans le temps
Temps écoulé depuis le dépôt du disque : 2h 4h 6h 8h 20 Evolution du gradient dans le temps 15 Concentration en antibiotique dans le milieu gélosé (UI/mL) 10 5 3 5 10 15 Distance au centre de la source (mm) Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Facteurs influençant les résultats
Facteurs influençant la diffusion de l’antibiotique : Epaisseur de la gélose Concentration en agar Taille et charge du disque Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Facteurs influençant les résultats
Facteurs influençant l’activité de l’antibiotique : Concentrations ioniques du milieu (Ca2+, Mg2+) pH du milieu Concentration de l’inoculum bactérien Pré-incubation / Pré-diffusion Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Influence de l’inoculum
Diamètre d’inhibition (mm) 26 24 22 20 18 Concentration bactérienne de l’inoculum (UFC/mL) 16 Aspect de la culture après 18h d’incubation 108 107 106 105 104 103 Colonies tangentes Colonies isolées Nappe Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Influence Pré-incubation / Pré-diffusion
Diamètre d’inhibition (mm) S.aureus E.coli Avantage à la bactérie 30 25 Avantage à l’antibiotique a et b : temps critiques 20 15 a b Temps (h) 8 6 4 2 2 4 6 8 Pré-incubation : retard au dépôt des disques Pré-diffusion : retard à l’incubation Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
Méthode standardisée Selon le Comité de l’antibiogramme de la Société Française de Microbiologie ( Milieu Mueller Hinton Epaisseur 4 mm Inoculum permettant d’obtenir des colonies adjacentes mais non confluentes Pré-diffusion = Pré-incubation Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Construction des abaques 1
Souche X Détermination du diamètre d’inhibition en milieu gélosé Détermination de la CMI en tubes CATB (mg/l) 16 8 4 2 1 0,5 0,25 CMI Diamètre d’inhibition Relation CMI/ Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Construction des abaques 2
Répétition pour un grand nombre de souches Relation CMI/ Droite de corrélation / Log2CMI Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Construction des abaques 3
(mm) Droite de corrélation 35 30 25 20 15 10 5 CMI mg/L (échelle log2) 0,25 0,5 1 2 4 8 16 Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Notion de Concentrations critiques
Les Concentrations critiques sont : des Concentrations de référence en antibiotique inférieure (c) et supérieure (C) permettant de classer les souches bactériennes dans des catégories cliniques (S, I ou R) en fonction de leur CMI permettant donc d’évaluer la probabilité de succès d’une antibiothérapie Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Notion de Concentrations critiques
- les concentrations critiques sont fixées par : le CA-SFM (Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie) l’EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Notion de Concentrations critiques
c et C déterminées par des: - Etudes pharmacologiques : concentrations en ATB moyennes minimales (c) et maximales (C) obtenues dans le plasma, et les tissus ; - Etudes bactériologiques : distribution des CMI vis-à-vis des différentes espèces pathogènes ; - Etudes cliniques : confrontation des CMI estimées in vitro et des résultats thérapeutiques Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND
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Construction des abaques 4
(mm) Concentrations critiques et construction de l’abaque 35 30 D 25 1 25 20 15 d 4 13 10 5 0,25 0,5 1 2 4 8 16 CMI mg/L CATB (mg/L) Diamètre (mm) c C
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Lecture / Interprétation : Cas 1
Diamètre (mm) D d 1 c C CATB (mg/L) 1 > D Forte probabilité de succès thérapeutique Souche sensible CMI < c
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Succès thérapeutique imprévisible
Lecture / Interprétation : Cas 2 Diamètre (mm) D d 2 c C CATB (mg/L) D > 2 > d Souche intermédiaire Succès thérapeutique imprévisible c < CMI < C
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Forte probabilité d’échec thérapeutique
Lecture / Interprétation : Cas 3 Diamètre (mm) D d 3 c C CATB (mg/L) D > 3 Forte probabilité d’échec thérapeutique Souche résistante C < CMI
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Lecture / Interprétation : Synthèse
Diamètre (mm) D d S I R c C CATB (mg/L) Zone de sensibilité Zone intermédiaire Zone de résistance
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