BASES DE BACTERIOLOGIE

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1 BASES DE BACTERIOLOGIE

2 Le laboratoire de Bactériologie réalise l’étude bactériologique des prélèvements provenant de patients infectés. Ce qui permet : De confirmer le diagnostic d’infection. De déterminer quelle est l’espèce ou les espèces bactériennes responsables de cette infection. De déterminer à quels antibiotiques ces bactéries sont sensibles c’est-à-dire avec quels antibiotiques il faudra traiter le patient pour le guérir de son infection.

3 Une bactérie c’est un être vivant unicellulaire composé de plusieurs éléments

4 Structure de la paroi bactérienne

5 Structure de la paroi bactérienne

6 _________________________________________________
NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGl c NAcMur L-Ala L-Ala D-Ala D-Glu D-Glu + L-Lys Gly (5) L-Lys Gly (5) L-Lys Gly (5) D-Ala D-Ala D-Glu Transpeptidase L-Lys Gly (5) D-Ala L-Ala D-Glu L-Ala NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc NAcMur NAcGlc ___________________Bêta-lactamines ____________________

7 Structure d’un phospholipide

8 Différence Gram positifs Gram négatifs

9 GENETIQUE BACTERIENNE
Plusieurs mécanismes de transfert de l’information génétique. Mutations Fréquence 1/10-7 Préexistent au contact avec l’agent mutagène. Elles sont spontanées et peuvent toucher n’importe quel type de caractère: biochimique ou résistance à un antibiotique….

10 Transduction Transmission d’information génétique par l’intermédiaire d’un bactériophage. Ce bactériophage va se fixer sur une bactérie et va infecter cette cellule bactérienne. Il va comme une seringue lui injecter son ADN.

11 Bactériophage a la surface d’une bactérie

12 Puis il va se multiplier dans la bactérie en incorporant une fraction de l’ ADN bactérien.
Il va ensuite lyser cette bactérie, puis il va infecter une nouvelle bactérie réceptrice. En lui transmettant de fragments de l’ADN de la première bactérie il va lui conférer d’autres caractères liés aux gènes qu’il lui aura transféré.

13 Transformation chez le pneumocoque
Souche R vivante DNA souche S tuée Souche S vivante + =

14 Conjugaison C’est le transfert de matériel génétique d’une bactérie mâle à une bactérie femelle par l’intermédiaire d’un pili sexuel.

15 Conjugaison au microscope électronique

16 Le transfert d’ADN est fonction du temps de contact entre les deux bactéries et l’étude des caractères des bactéries réceptrices et de leur temps d’apparition permet d’établir la cartographie du plasmide transféré.

17 COLORATION DE GRAM Elle repose sur la différence de constitution de la paroi bactérienne. On réalise un frottis du prélèvement sur une lame. On fixe la préparation soit à l’alcool soit à la chaleur. On recouvre la lame de Violet de Gentiane ou de Cristal violet. On recouvre la lame de lugol pour fixer le violet.

18 On décolore ensuite à l’alcool, jusqu’à ce qu’il n’entraîne plus de violet.
On recolore à la fuchsine. On observe ensuite la lame au microscope à l’objectif x 100, après avoir recouvert la lame d’huile à immersion.

19 Staphylocoques Streptocoques
COLORATION DE GRAM Cocci à Gram positif Staphylocoques Streptocoques

20 Cocci à Gram négatif

21 Bacilles à Gram positif Clostridium perfringens Clostridium botulinum
COLORATION DE GRAM Bacilles à Gram positif Clostridium perfringens Clostridium botulinum

22 Bacilles à Gram négatif
COLORATION DE GRAM Bacilles à Gram négatif Pseudomonas aeruginosa Fusobacterium

23 Coloration de Ziehl-Neelsen Bacilles acido-alcoolo résistants

24 Coloration à l’auramine

25 Examen au fond noir Treponema pallidum

26 Technique d’immunofluorescence pour l’identification de bactéries

27 Aspect en microscopie électronique de bactéries de forme bacillaire

28 TYPES RESPIRATOIRES Aérobies strictes Aéro-anaérobies facultatives
Microaérophiles Anaérobies strictes

29 Dispositif Portagerm

30 Dispositif culturette anaérobie

31 Jarre à vide et sachet anaérobie

32 Enceinte anaérobie

33 Technique d’isolement

34 CULTURE SUR GELOSE ORDINAIRE
(TRYPTICASE-SOJA) Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa (Pyocyanique)

35 CULTURE SUR GELOSE AU SANG
Hémolyse bêta Pigmentation noire

36 CULTURE SUR MILIEU SELECTIF
(MILIEU DE DRIGALSKI) Lactose positif Lactose négatif

37 Microgaleries d’identification

38 Antibiogramme par diffusion

39 Antibiogramme par diffusion

40 Biologie moléculaire Extraction ADN Amplification PCR Restriction
Hybridation Signaux positifs Gène à étudier Amplification PCR Analyse de séquence comparative référence Restriction Séparation Analyse comparative des signaux 1 2 5 4 3 7 6

41 Orientation vers diagnostic bactériologique
Examen direct interprété (site de prélèvement) Faire la distinction entre flore normale, de colonisation …et l’infection Flores commensales Cutanée : Staphylocoques coag neg, Enterococcus ssp corynébactéries, Acinetobacter ssp, propionibacterium ssp Oro-pharyngée: Streptococcus ssp, anaérobies, Neisseria ssp, corynébactéries Digestive : Anaérobies, Escherichia coli, Entérobactéries Vaginale : Lactobacilles

42 Références: