Mariana Baz 1, Jesse Papenburg 1, Marie-Ève Hamelin 1, Chantal Rhéaume 1, Julie Carbonneau 1, Manale Ouakki 2, Isabelle Rouleau 2, Hugues Charest 2, Gaston.

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1 Mariana Baz 1, Jesse Papenburg 1, Marie-Ève Hamelin 1, Chantal Rhéaume 1, Julie Carbonneau 1, Manale Ouakki 2, Isabelle Rouleau 2, Hugues Charest 2, Gaston De Serres 2, Guy Boivin 1 1 Centre de recherche en infectiologie, CHUQ-CHUL et Université Laval 2 Institut national de santé publique du Québec

2  Le diagnostic précis de l’influenza est important pour: 1.Offrir un traitement approprié 2.Instaurer des mesures de prévention adéquates  Les définitions cliniques souffrent d’un manque de sensibilité et de spécificité et ne peuvent évaluer les infections asymptomatiques 1-4 1-Call et al. JAMA 2005 2- Boivin et al. Clin Infect Dis 2000 3-Monto et al. Arch Intern Med 2000 4-Zambon et al. Arch Intern Med 2001

3  Les méthodes de laboratoire sont donc complémentaires au diagnostic clinique ◦ RT-PCR est la méthode de choix, mais les faux négatifs peuvent survenir 1-3 ◦ La sérologie peut capter des cas d’infection manqués par RT-PCR 3  Absence de données comparant les méthodes de diagnostic clinique, moléculaire et sérologique pour l’influenza A/H1N1 2009 pandémique (pH1N1) 1.IDSA Guidelines. Clin Infect Dis 2008 2.Singh et al. J Clin Microbiol 2010 3.Zambon et al. Arch Intern Med 2001

4  Comparer la performance de 3 méthodes de diagnostic chez des patients infectés par le pH1N1 et leurs contacts familiaux 1.Diagnostic clinique 2.Diagnostic moléculaire (RT-PCR) 3.Diagnostic sérologique a)Inhibition de l’hémagglutination (IHA) b)Microneutralisation (MN)

5  Étude prospective observationnelle évaluant la durée d’excrétion virale et la transmission intrafamiliale du virus pH1N1chez des patients non-hospitalisés et leurs contacts familaux 1 ◦ Mai à juillet 2009 ◦ Ville de Québec  42 familles ◦ 43 cas primaires pH1N1 confirmés ◦ 119 contacts  Suivi clinique prospectif sur 3-4 semaines 1-De Serres et al. Emerg Infect Dis 2010

6  Écouvillon nasopharyngée (Nylon Flocked Swab, Copan Innovation) ◦ Sur chaque participant à la visite initiale, au jour 8 et, si encore (+), au jour 11  Milieu de transport: ◦ 3mL de Universal Transport Medium (Copan Innovation)  Extraction ARN: ◦ 200 μl du spécimen (QIAGEN Viral RNA mini kit, QIAGEN)  RT-PCR conventionnel: ◦ Méthode spécifique pH1N1 (gène HA) 1  Sensibilité analytique 20-200 copies / réaction ◦ Méthode influenza A général (gène M) 2  Sensibilité analytique 2-20 copies / réaction  PCR quantitatif en temps réel (gène M) 3 1-Leblanc et al. J Clin Micro 2009 2- Fouchier et al. J Clin Micro 2000 3-CDC 2005

7  Participants ≥ 7 ans seulement ◦ Sérum aigu (visite initiale) ◦ Sérum convalescent (3-4 semaines) ◦ MN et IHA 1  Définition de séroconversion ◦ Sérum aigu < 1:10 et sérum convalescent ≥ 1:40 ou ◦ Augmentation de ≥4 fois du titre entre les deux sérums 1-World Health Organization. WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance. http://www.who.int/vaccine_research/diseases/influenza/WHO_manual_on_animal-diagnosis_and_surveillance_2002_5.pdf. http://www.who.int/vaccine_research/diseases/influenza/WHO_manual_on_animal-diagnosis_and_surveillance_2002_5.pdf Avec modifications.

8  Définition clinique ◦ Syndrome d’allure grippal (SAG) 1  Fièvre (≥ 37.8°C) ou sensation fébrile et  Toux ou mal de gorge 1-Centers for Disease Control 2010 http://www.cdc.gov/flu/weekly/fluactivity.htm http://www.cdc.gov/flu/weekly/fluactivity.htm

9 RT-PCR spécifique pH1N1+- RT-PCR Flu A général+423 -074 45 cas secondaires détectés par RT-PCR 45 / 45 (100%) par RT-PCR influenza A général 42 / 45 (93%) par RT-PCR spécifique pH1N1 *Parmi 119 contacts familiaux de cas primaires avec pH1N1 confirmé

10 IHA+- MN + 3716 - 162 IHA : 38 / 54 séroconversions (70,3%) MN :53 / 54 séroconversions (98,2%) *116 patients avaient une paire de sérums analysable par MN et IHA

11 *58 patients RT-PCR(+) avaient une paire de sérums analysable par MN et IHA IHA+- MN + 3513 - 010 Sens. IHA : 35 / 58 = 60,3% (IC95% 46,6% - 72,7%) Sens. MN : 48 / 58 = 82,8% (IC95% 70,1% – 91,0%) MN plus sensible que IHA pour détecter infection pH1N1 chez patients positifs par RT-PCR (p= 0.0002)

12 RT-PCR+- MN + 469 - 1053 *118 patients avaient une paire de sérums analysable par MN Concordance entre résultat MN et résultat RT-PCR: 99 / 118 = 83.9% Bon accord entre les deux méthodes (Kappa = 0.68)

13 SAG pH1N1 (+) pH1N1 (-) Total SENSIBILITÉ (IC 95%) SPÉCIFICITÉ (IC 95%) VPP (IC 95%) VPN (IC 95%) Tous les contacts SAG (+)31334 58% (44% - 72%) 95% (87% - 99%) 91% (76% - 98%) 74% (63% - 83%) SAG (-)226385 Total5366119 Enfants (≤ 17 ans) SAG (+)17320 74% (52% - 90%) 88% (67% - 97%) 85% (62% - 97%) 78% (57% - 91%) SAG (-)62127 Total232447 Adultes (≥ 18 ans) SAG (+)140 47% (29% - 66%) 100% (91% - 100%) 100% (77% - 100%) 72% (59% - 83%) SAG (-)164258 Total304272 *Infection pH1N1 confirmée par RT-PCR et/ou séroconversion Note: 5 infections asymptomatiques, dont 2 identifiées par RT-PCR, 2 par sérologie et 1 par les deux méthodes

14  Pas d’association entre les Titres Géométriques Moyens(TGM) convalescents et: ◦ Âge ◦ Statut vaccinal influenza saisonnier 08-09 ◦ Résultat culture virale ◦ Résultat RT-PCR ◦ Résultat charge virale pH1N1

15  MN est plus sensible que IHA pour détecter une infection pH1N1  Bon accord entre résultats MN et RT-PCR ◦ Les deux méthodes sont complémentaires ◦ Permettent la détection d’infections asymptomatiques ou atypiques de pH1N1  SAG pour le diagnostic pH1N1: ◦ Manque de sensibilité ◦ Très bonne spécificité

16 Questions?