La propolis atténue la néphrotoxicité induite par le cobalt chez les rats adultes et leur descendance Article réalisé par: El Mouldi Garoui; Afef Troudi;

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1 La propolis atténue la néphrotoxicité induite par le cobalt chez les rats adultes et leur descendance Article réalisé par: El Mouldi Garoui; Afef Troudi; Hamadi Ftoui; Nejla Soudani; Tahia Boudawara; Najiba Zeghal Exposé présenté par: Rachid Mahmoud Master: Sciences Biologiques et Santé

2 Sommaire Mode Opératoire Discussion Résultats Introduction Master: Sciences Biologiques et Santé

3 Introduction Source du Cobalt Alliages Pigments poterie Céramiques Master: Sciences Biologiques et Santé

4 Introduction à faibles doses : Cofacteur pour l’activation de plusieur Enzymes et la formation du V B12 et autres cobalamines À fortes doses; Il présente divers effets sur plusieurs tissus Co est soupçonné d'être toxique pour les nombreux types de cellules comme les cellules gliales Co peut provoquer aussi la mort cellulaire par apoptose ou nicrose Il peut causer aussi la fragmenation de l’ADN et l’activation de la caspase 3 Master: Sciences Biologiques et Santé

5 Introduction Co stress oxydatif ROS peroxydation des lipides et l’oxydation des protéines Propolis: les acides aromatiques et les composés phénoliques et les flavonoïdes Master: Sciences Biologiques et Santé

6 Objectif de l’étude: Déterminer si: Il y aura des changements dans l’activité des enzymes antioxydant (superoxide dismutase, catalase, et la glutathionne peroxydase) et les biomarqueurs fonctionnels des reins ( la créatinine, l’urée) pour les rats exposés au cobalt durant la grossesse et l’allaitement Si les changements ont été associé à un stress oxydant ( Analyse par l’acide thiobarbiturique) Si l’administration orale du Propolis à des rats traités au cobalt pouvait moduler les activités enzymatiques antioxidantes in vivio Master: Sciences Biologiques et Santé

7 Matériels et Méthodes: Collection et Extraction de la Propolis Obtenu depuis les colonies des abeilles( nourries en Acacia) dans la région de Mahares (Sud de Sfax) 30g de la Propolis 100ml de l’éthanol 70% T° ambiante dans l’obscurité avec secouage modéré/une semaine Les extraits ont été filtrés et concentrés à sec avec un évaporateur rotatif à 50 ± 1 ° C pour donner des résidus solides Master: Sciences Biologiques et Santé

8 Animaux et conception expérimentale 24 rats Wistar pesant 170 ± 10 g, obtenus de Central Pharmacie (SIPHAT, Tunisie), ont été logés dans des cages en plastique dans une installation contrôlée avec un cycle de lumière/obscurité constant à une température de 22 ± 2 ° C et une humidité relative de 40 %. Master: Sciences Biologiques et Santé

9 24Wister Groupe 1 Témoin négatif Groupe2 Co Grp 2 Groupe3 Co-Pro Grp 3 Groupe 4 Pro Grp 4 Eau distillée par voie orale Consommé seule à une dose de 1 g / 100 g de régime 350 ppm de CoCl2 + un suppliment du propolis 1g de propolis/ 100g de régime 350 ppm de COCl2 (1/9 de DL50) dans l’eau Dans les 24 h suivant l'accouchement, les litières des groupes témoins et traités ont été abattues pour 8 souriceaux Le traitement était du jour 14 de la grossesse au 14 éme jour après l’accouchement Animaux et conception expérimentale Master: Sciences Biologiques et Santé

10 Animaux et conception expérimentale À la fin de la période expérimentale, les mères (n = 24) et les souriceaux (n = 192) ont été euthanasiés Les échantillons sanguins on été héparinés et centrifugé à 2200 xg pendant 15 min à 4 ° C Des échantillons de plasma ont été prélevés et maintenus à -20 ° C jusqu'à ce que des dosages biochimiques Des échantillons urinaires ont été recueillis en bouteilles chaque 24h Le volume de chaque échantillon a été enregistré et centrifugé à 3000 xg pendant 5 min Master: Sciences Biologiques et Santé

11 Animaux et conception expérimentale  Quelques échantillons des riens (à gauche ou à droite) de chaque groupe de mères (n = 6) et de souriceaux (n = 10) ont été utilisés de façon aléatoire pour l'analyse des marqueurs du stress oxydant.  Le tissu rénal était hachées et homogénéisées dans une solution saline de tampon phosphate appropriée et centrifugées.  Le surnageant résultant a été utilisé pour divers essais biochimiques.  Six échantillons de chaque groupe ont été immédiatement fixés dans la solution de formaline pour les études histologiques. Master: Sciences Biologiques et Santé

12 Analyses Biochimiques Les concentrations sériques de lactate déshydrogénase (LDH), de créatinine, d'urée et d'acide urique ont été estimées par spectrophotométrie La clairance de la créatinine : UV / P Master: Sciences Biologiques et Santé

13 Analyses Biochimiques Analyse BiochimiqueLa méthode adoptée La détermination du malondialdéhydeTBARS Superoxyde dismutase (SOD)Beauchamp and Fridovich (1971)/560nm Catalase (CAT)Aebi 1984 / 240nm Glutathione (GSH) des reinsEllman 1659 modifié par Jollow et al 1974/ 412nm Glutatione peroxidase (GPx)Flohe and Gunzler (1984) / nmol de GSH oxydé / min / mg de protéine Teneur en protéinesLowry et al (1951), en utilisant de la sérumalbumine bovine comme étalon. Teneur totale en phénol dans la propolisJulkunen-Titto (1985)/ 735nm Teneur totale en flavonoïdes dans la propolis Zhisten et al. (1999)/ 510 nm Contenu de tanins condensés dans la propolis Julkunen-Titto (1985)/500nm Master: Sciences Biologiques et Santé

14 Résultats Master: Sciences Biologiques et Santé

15 Résultats Biomarqueurs de la dysfonction rénale Master: Sciences Biologiques et Santé

16 Activité de lactate déshydrogénase dans des homogénats plasmatiques et rénaux Master: Sciences Biologiques et Santé

17 Dosage moyen par groupe du peroxydase lipidique Dosage moyen par groupe du GPx, SOD et GSH dans le rein Master: Sciences Biologiques et Santé

18 Le taux des phenols et des flavonoides et tanins condensés Master: Sciences Biologiques et Santé

19 Les études histopathologiques des reins pour les rats adultes Espace glomérulaire Infiltration des Leucocytes Congestion vasculaire Master: Sciences Biologiques et Santé

20 Les études histopathologiques des reins pour les souriceaux Espace glomérulaire Infiltration des Leucocytes Congestion vasculaire Master: Sciences Biologiques et Santé

21 Discussion Cette enquête a révélé que la propolis a amélioré a corrigé les dommages des reins induits par l’adminstration orale du cobalt les principaux constituants pharmacologiquement actifs du propolis sont des flavonoïdes et des acides phénoliques et leurs esters l'acide phtalique de l'acide caféique (CAPE) et l'acide 3,5-diprényl-4- hydroxycinnamique (artepilline C) L'altération de l'appétit chez les rats traités au cobalt pourrait expliquer la diminution de l'apport en eau et en nourriture pendant la période de lactation L'administration diététique de la propolis à des animaux traités au cobalt a amélioré la consommation alimentaire des rats en lactation et induit une récupération partielle des poids corporels et rénaux de leurs petits. Les métaux et les métaloides inhibent l'incorporation d'acides aminés dans les protéines provoquant une augmentation des taux d'urée et de créatinine qui sont les principaux produits métaboliques azotés du métabolisme des protéines Master: Sciences Biologiques et Santé

22 L’insuffisance rénale constaté par cette équipe après le traitement au cobalt et par d'autres chez l'homme et chez les rats exposés à d'autres polluants On outre; Il ont observé que le volume urinaire considérablement augmenté après le traitement au cobalt. Il a été montré que les tubules proximaux semblent être le site principal de la néphrotoxicité induite par les métaux En effet, les cellules des tubules proximaux étaient gonflées et présentaient une vacuolisation et une dégénérescence chez les rats après administration de composés de cobalt. Master: Sciences Biologiques et Santé

23 La régénération accélérée des cellules parenchymateuses sous l'influence de divers composés bioactifs tels que les flavonoïdes et les esters présents dans la propolis qui ont contribué à prévenir la fragilité de la membrane et ont ensuite diminué la fuite des enzymes marqueurs en circulation (Bhadauria et al., 2008). Ces composés présents dans la propolis pourraient empêcher la consommation supplémentaire d'antioxydants endogènes non enzymatiques et augmenter leurs niveaux dans le tissu rénal. Les flavonoïdes, présents dans la propolis, augmentaient l'expression de la gamma-glutamyl cysteine synthase et la production de glutathion. Master: Sciences Biologiques et Santé

24 L'exposition au cobalt augmente la production de ROS intracellulaire et augmente la peroxydation lipidique En effet, l'augmentation de l'activité extracellulaire de la LDH est le résultat d'une perturbation de l'intégrité de la membrane cellulaire, qui se produit pendant la peroxydation lipidique, sous l'influence des radicaux libres et dans les conditions de stress oxydatif Le glutathion est une composante cruciale du mécanisme de défense antioxydant et il fonctionne comme un agent radicalaire direct réactif (Romao et al., 2006). Dans la présente étude, une diminution du taux de GSH rénaux chez les rats en lactation traités au cobalt et leur descendance peut être due à son utilisation accrue par les cellules rénales pour éliminer les radicaux toxiques. En outre, on a montré que les antioxydants non enzymatiques tels que la vitamine C et la vitamine E décroissaient simultanément avec le GSH pour les rats traité au cobalt (Yildirm et Buyukbingol, 2003). Il a été suggéré que l'épuisement du groupe sulfhydryle intracellulaire par le cobalt est la condition préalable à la génération de ROS et la perturbation suivante des organites intracellulaires (Battaglia, 2009). Master: Sciences Biologiques et Santé

25 Dans la présente étude, les niveaux accrus de MDA peut être liée à une insuffisance du potentiel antioxydant et la génération de divers radicaux libres Supplémentation de propolis était associée à une activité accrue des enzymes antioxydantes et du niveau de GSH dans le rein et l'amélioration des aspects histologiques du tissu rénal. l ’ augmentation de la quantité de produits ROS qui attaquent les membranes, les lipides et les protéines et affectent l’histoarchitecture de rein comme démontré par cette équipe et par d'autres En résumé, cette étude démontre que la propolis a des propriétés protectrices de la néphrotoxicité induite par le cobalt chez les rats et leurs descendants par l'extinction des radicaux libres, Master: Sciences Biologiques et Santé