Milieu de CHAPMAN.

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1 Milieu de CHAPMAN

2 Sommaire I Intérêt de ce milieu II Principe III Composition
IV Lecture et interprétation V Tests supplémentaires VI Tableau récapitulatif

3 I Intérêt du milieu Milieu sélectif des bactéries halophiles*
Staphylococcus Micrococcus Bacillus rares bactéries à Gram négatif *microorganismes exigeant des concentrations élevées de NaCl pour leurs croissances

4 II Principe Inhibiteur: Forte concentration de NaCl (75 g/L), ce qui permet un isolement sélectif de bactéries tolérant ces fortes concentrations. Permet d’étudier la fermentation du mannitol par virage au jaune de l’indicateur coloré de pH : le rouge de phénol, autour des colonies.

5 III Composition Peptones 11,0 g Extrait de viande Chlorure de sodium
Mannitol Rouge de phénol Agar Eau distillée (qsp) 11,0 g 1,0 g 75 g 10,0 g 0,025 g 15,0 g 1000 mL

6 IV Lecture et interprétation
Pas de virage ( le milieu reste rouge) : les bactéries sont mannitol - car elles ne fermentent pas le mannitol, légère alcalinisation du milieu par l'utilisation de peptones pour leur métabolisme énergétique. Virage au jaune du milieu : les bactéries sont mannitol + car elles fermentent le mannitol pour leur métabolisme énergétique avec acidification du milieu. Remarque: L'utilisation du mannitol se traduira par une acidification du milieu, provoquant le virage au jaune de l'indicateur de pH. Les colonies des bactéries mannitol + sont entourées d’une auréole jaune. L'utilisation du mannitol est un caractère discriminatif important dans le genre Staphylococcus, Staphylococcus aureus étant mannitol +, mais ce n’est pas le seul.

7 V Tests supplémentaires
le milieu de Chapman permet la sélection des Staphylococcus  et une orientation pour l’identification de l’espèce S. aureus. Mais il ne s’agit que d’un test de présomption et une confirmation par des tests plus spécifiques reste obligatoire : Présence d’une coagulase libre Présence d’un récepteur au fibrinogène et/ ou de la protéine A Présence d’une Dnase.

8 5.1 Test de la coagulase libre
Principe: La coagulase est un test utilisé pour l’identification de Staphylococcus aureus. Cet enzyme se présente sous deux formes liée (test sur lame )ou libre (test en tube), lesquelles ont des propriétés différentes et nécessitent des tests différents pour les identifier.

9 5.1.1 Test de coagulase libre
Thrombine prothrombine Polymérisation en caillot Fibrine + H2o Fibrine + peptide La coagulase agit en transformant la prothrombine en thrombine qui sera active sur le fibrinogène afin de le transformer en fibrine (formation de caillot)

10 Plasma (0,5 ml)+ bactérie (0,5 ml)
Pas de coagulation Coagulase libre - 24 à 37 h Pas de fibrine Plasma (0,5 ml)+ bactérie (0,5 ml) Coagulase libre + Coagulation: fibrinogène transformé en fibrine + peptides. Lecture: Toutes les 30 minutes pendant 24 h Coagulum