S. YAHI, A. AZZAM, N. ACHIR, C. BOUTALBI, L. CHERIFI, F. BOUBRIT, A

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1 EXAMENS VIROLOGIQUES DE HBV-HCV AU NIVEAU DU LABORATOIRE DE MICROBIOLOGIE CHU-TO bilan de six mois
S. YAHI, A. AZZAM, N. ACHIR, C. BOUTALBI, L. CHERIFI, F. BOUBRIT, A. ABDOUN, T. LARBI, S. BOUALEM, N. SEKLAOUI

2 I. INTRODUCTION Les hépatites virales B et C constituent un véritable problème de santé publique Evolution dans la majorité des cas vers la chronicité avec des conséquences graves en termes de morbi- mortalité (cirrhose, CHC) Le diagnostic virologique est indispensable pour une prise en charge adéquate et efficace des sujets atteints Le dépistage, le traitement curatif et la vaccination sont les principaux moyens de lutte contre ces infections.

3 II. OBJECTIFS Connaître pour chaque virus des hépatites les marqueurs virologiques et sérologiques réalisés au niveau du laboratoire et les moyens utilisés dans ce but Connaître l’état des lieux des tests de diagnostique et du dépistage des hépatites virales durant six mois de l’année 2017

4 III. MATERIEL ET METHODE
Etude rétrospective sur 7648 examens sérologiques et 130 charges virales du VHB et VHC, réalisés au laboratoire de microbiologie du CHU-TO La période étudiée s’étend du mois de janvier à juin 2017 Les marqueurs sérologiques ont été recherchés par technique de chimiluminescence sur Architect (Abbot) La charge virale a été réalisée par technique PCR en temps réel sur Cobas AmpliPrep/taqman 48 (Roche).

5 III. MATERIEL ET METHODE 1. automate pour serologie virale
AUTOMATE ARCHITECT ABBOT

6 aRCHITECT: principe du fonctionnement
Le principe du dosage se base sur une méthode de chimiluminescence indirecte. utilise comme phase solide des particules magnétiques recouvertes d’auto-antigènes et un anticorps conjugué à un dérivé d’ester d’acridinium (DMAE=luminol lorsqu’il est oxydé il emet une lumiére) comme marqueur de détection. L’utilisation d’antigènes de haute qualité et le revêtement uniforme des particules magnétiques assurent un excellent niveau de sensibilité 1. les auto-anticorps spécifiques présents dans les échantillons, se lient à l’antigène immobilisé 2. Durant la deuxième incubation, le conjugué DMAE se fixe aux complexes “particules magnétiques coatées-auto-anticorps” 3. Le matériel non lié est éliminé par lavage après chaque phase d’incubation 4. La chimiluminescence est activée par l’ajout de solutions d’activation: solution A (peroxyde d’hydrogène) et solution B (une solution alcaline), qui engendrent l’oxydation de l’ester (état excité). Le retour à l’état de stabilité est accompagné par l’émission de lumière

7 aRCHITECT: PERMET - Dosage immunologique microparticulaire par chimiluminescence –Résultat en S/CO: signal de l’échantillon sur signal de la valeur seuil. –Détection qualitative et quantitative des anticorps ( anti Hbs, anti HCV….) et des antigénes (AgHBs, AgHBe) –Valeur supérieure ou égale à 1,00: positive –Spécificité: 99,7% –Sensibilité: 99,3%

8 Marqueurs VHB détectés par architect
1. Marqueurs directs de la réplication virale : Ag HBs: signe la présence du VHB dans l’organisme  Ag HBe: marqueur de réplication active (attention en cas de mutant pré-C charge virale)  2. Marqueurs indirects de la réponse immune : anti-HBc: marqueur de contact avec le VHB  anti-HBe : marqueur d’arrêt de la réplication virale anti-HBs : marqueur biologique de guérison ou de vaccination Vérifier igm hbc et igg hbc

9 MARQUEURS VHC détectés par architect
Marqueurs sérologiques Anticorps dirigés spécifiquement contre les virus Anti HCV: signent soit une infection ou une guérison.

10 2. Automate pour PCR EN temps réel cobas Ampliprep /TAQMAN 48 (roche)

11 Pcr en temps réel définition
Technique simple et rapide (< 2 H) qui consiste à amplifier in vitro un gène cible, spécifique et stable dans le temps. Elle permet de suivre en continu la réaction d’amplification grâce à une sonde .

12 COBAS /TAQMAN: principe
Ce sont des sondes marquées à une extrémité par un fluorochrome émetteur , et à l’autre extrémité par un suppresseur qui inhibe l’émission du reporter lorsqu’ils sont à proximité. Au cours de la PCR, si la sonde est hybridée sur sa cible (amplicon), elle est ensuite hydrolysée par l’ADN polymérase lors de l’élongation. Le fluorochrome émetteur ainsi séparé du suppresseur émet un signal proportionnel au nombre de sondes hydrolysées, mesurable au moment de l’élongation.

13 COBAS/TAQMAN: AVANTAGES
Automate de diagnostic moléculaire: ARN, ADN Intervalle de quantification linéaire, très étendu. Possibilité de multiplex ( détecter plusieurs gènes à la fois) Résultats en unités internationales par millilitre (UI/ml). Très sensible avec une limite inférieure de détection de l’ordre de 12 UI/ml pour HBV et 15 UI/ml pour HCV Spécificité > 99,5 % pour HBV et HCV. Vérifier 12 UI/ml

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15 Indications de la charge virale hcv
Toute sérologie positive ( Ac anti-HCV +) Diagnostic chez les personnes immunodéprimés. Evaluation de l’infection chez les transplantés. Accident d’exposition au sang Suivi de l’efficacité du traitement

16 AUTRES TESTS IMMUNOCHROMATOGRAPHIE

17 RESULTATS ET INTERPRETATION
La on passe à la partie statistique de notre étude

18 1. Nombre d’examens sérologiques hbv-hcv
HBV (Ag Hbs) HCV (Ac anti HCV) Janvier 2017 645 652 Février 2017 694 675 Mars 2017 604 636 Avril 2017 739 732 Mai 2017 701 695 Juin 2017 440 190 Total 3823 3570 Chez les malades hospitalisé

19 2. Nombre de tests positifs répartis par services
(HBV) 13 + Anti HCV 10+ Maladies infectieuses 4 (30, 7%) - Médecine interne 3 (23%) Néphrologie 1 (7,6%) 2 (20%) Gastrologie 2 (20%) Hémato-pédiatrie Cardiologie 1 (10%) PU- Chirurgie PU- Médecine Réa-médicale Neurochirurgie 1 (10%) sanatorium

20 3. SéROLOGIEs POSITIVEs SELON LE SEXE
HBV Ag Hbs HCV Ac Sexe Homme Femme Nombre 9 4 5 % 69,2 30,8 50

21 4. Depistage hbv-HCV de janvier à juin 2017
Nombre total 130 125 Nombre résultat positif 6 5 Pourcentage résultat positif 4,6 % 4 % Intérêt du dépistage

22 5. CHARGE VIRALE HBV-HCV de janvier à juin 2017
Nombre total 83 47 Résultat positif 44 17 % des positifs 53,01 36,17 Ajouter intérêt de la charge virales

23 Interprétation des examens virologiques hbv

24 Interprétation des examens virologiques hcv

25 V. conclusion Le laboratoire de microbiologie détient un rôle incontournable dans le diagnostic étiologique, le suivi des malades, l’évaluation de l’efficacité thérapeutique, et le dépistage des hépatites virales. Afin d’atteindre ces objectifs nous disposons de techniques très sensibles et spécifiques. Tests rapides immunochromatographiques en cours d’évaluation ( manque de sensibilité…)

26 MERCI POUR VOTRE ATTENTION