Fixation : glutaraldéhyde tétroxyde d'osmium Inclusion : Epon

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1 Fixation : glutaraldéhyde tétroxyde d'osmium Inclusion : Epon
Quelques techniques simples de quantification Notation des marquages et évaluation de l'intensité Notation 0 (-) pas de réaction + réaction faible moyenne excellente exceptionnelle Antisérum :1/dilution ++++ +++ ++ + (+) coupe déchirée Intensité du marquage Abondance (ou nombre) de cellules marquées Intensité du bruit de fond Commentaire Exemple 100 1000 Intensité 10 000 Représentation graphique . Intensité Epaisseur de coupe (nm) Pancréas de poulet Fixation : glutaraldéhyde tétroxyde d'osmium Inclusion : Epon Marquage : 1° anticorps : lapin anti glucagon 2° anticorps : anti-lapin - FITC 75 500 1000 2000 3000 Marquage spécifique Bruit de fond Coupes sériées d'épaisseur croissante 1 2 3 4 Exemple d'application : influence de l’épaisseur des coupes sur l’intensité de la réaction

2 Glicentine (précurseur du glucagon) Pancréas de poulet
Peptide ng/ml 0,01 0,1 1 10 100 Intensité de fluorescence Glicentine Glugagon Bruit de fond Glicentine (précurseur du glucagon) Pancréas de poulet Préparation : idem page précédante Marquage : 1° anticorps : lapin anti glucagon pré-incubé avec des concentration croissantes de glucagon ou de glicentine 2° anticorps : anti-lapin - FITC Exemple d'application : contrôle de spécificité (microscopie optique) [Antigène] Intensité 1 2 3 Effet de « crochet » (hook effect) : cas de la compétition

3 Effet de « crochet » (hook effect) : cas de la dilution
Dilution Ac Intensité 1 2 3 Lavage Exemple d'application : cinétique d’internalisation d’un anticorps armé dans une cellules tumorale (immunothérapie)

4 Quantification de l’endocytose