ELISA.

Présentation au sujet: "ELISA."— Transcription de la présentation:

1 ELISA

2 ELISA Enzyme

3 Enzyme ELISA Linked

4 Enzyme Linked ELISA ImmunoSorbent

5 Enzyme Linked ImmunoSorbent ELISA Assay

6 ELISA Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay E E Anticorps Antigène

7 Principe du test ELISA (1)
Coating de l ’Ag ou de l’Ac Support Tampon de coating Lavages Saturation Saturation Lavages

8 Principe du test ELISA (2)
Addition du ligand marqué avec l’enzyme E E Enzymes Lavages: PBS-Tween Addition du substrat de l ’enzyme E Substrats Substrat incolore Produit coloré

9 Les différents types d’ELISA
- Phase homogène - Phase hétérogène - ELISA direct - ELISA indirect - ELISA Sandwich - ELISA par compétition

10 S P Les ELISA en phase homogène E S E P
Antigène absent de l’échantillon E S P Antigène présent dans l’échantillon S P E

11 Les ELISA en phase hétérogène (1)
ELISA direct Anticorps marqué Antigène marqué S P S P E E ELISA indirect S P E Recherche d’anticorps dans le plasma

12 Les ELISA en phase hétérogène (2)
ELISA sandwich (1) Sandwich direct S P Symétrique Asymétrique E Sandwich indirect S P E

13 Les ELISA en phase hétérogène (3)
ELISA sandwich (2) Immunocapture : détection d’anticorps spécifiques S P E S P E

14 Les ELISA en phase hétérogène (4)
ELISA non compétitif DO Phase plateau Zone linéaire [antigène ou anticorps] Limite de détection

15 Les ELISA en phase hétérogène (5)
ELISA par compétition (1) Compétition au niveau de l’anticorps S P E Anticorps à doser Compétition au niveau de l’antigène S P E Élimination par lavage E Antigène à doser

16 Les ELISA en phase hétérogène (6)
ELISA par compétition (2) DO [antigène ou anticorps]

17 Choix du test - Quel est le but du test?
- Quels réactifs sont disponibles? - Quel va être l’utilisation de ce test?

18 Principe du kit utilisé pendant la partie pratique
Présence d’antigène Absence d’antigène Distribution des témoins et des échantillons S P Addition du mélange substrat-chromogène Distribution du conjugué HRP Cupule Coatée avec anticorps spécifique

19 Dosage d’IgG de lapins par un test ELISA direct
Addition de l’anticorps marqué avec la PAL Addition de l’anticorps marqué à la biotine S P Addition du mélange Chromogène-Substrat Addition de l’avidine recouverte de la PAL Coating de l’antigène (IgG de lapin)

20 Les techniques apparentées (1)
ELISPOT Cellules Culture cellulaire Lavages Nitrocellulose Révélation Apparition de spots E Addition d’un substrat précipitant

21 Les techniques apparentées (2)
- Western blot - immunocytochimie ou immunohistochimie Beaucoup plus loin………... - Immunofluorescence - Cytométrie en flux

22 Principles of Biacore analysis TM Incident light Refracted light 1
Gold film Prism 2 Ligand flow time Light refraction 1 2 Association Dissociation