Détection Antigène/anticorps

Présentation au sujet: "Détection Antigène/anticorps"— Transcription de la présentation:

1 Détection Antigène/anticorps
BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia Détection Antigène/anticorps Projet de biologie Moléculaire 15/04/2011

2 Objective Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment. Get a refraction index that indicates the bonding between the antibody in the surface and the peptides present. Follow the interaction between an immobilized peptide and an antibody in solution by using a surface Plasmonic Resonance.

3 Surface Plasmon Resonance
I0 I/I0 Angle I Angle Angle de résonance Or Prisme Mesure de l’angle de résonance du prisme L’angle de résonance est due à l’apparition d’une onde évanescente (plasmon)

4 Surface Plasmon Resonance
Les plasmons sont sensibles à la masse des éléments à la surface de la couche métallique Ainsi l’angle de résonance change en fonction de la masse “accrochée” à l’or

5 Protocole expérimental
Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Etape 2 : Dépôt des peptides Etape 3 : Vérification de l’homogénéité Etape 4 : SPR

6 Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme
Prisme d’or simple Nettoyage du prisme au plasma Bain dans l’aminothiol Lavage Prisme d’or fonctionnalisé

7 Etape 2 : Dépôt des peptides
Peptide K-linker-c-myc : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSEQKLISEEDL - COOH Peptide K-linker-Flag : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSDYKDDDDK – COOH Peptide K-linker-His : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSHHHHHH – COOH Dépôt au robot Blocage du prisme à l’éthanolamine

8 Etape 3 : Vérification de l’homogénéité
Suivi par mesure de la tension de surface Après chaque étape : mesure de l’angle de goutte Utilisation d’un goniomètre Suivi par marquage au SYPRO orange Protocole à détailler

9 Etape 4 : SPR Initialisation de l’appareil
Mesure de l’angle de résonance Passage des tampons avec les différents anticorps Obtention de courbe de réflexitivé en fonction de l’angle Mode pour déterminer la cinétique. Mode pour déterminer la concentration en anticorps.

10 Gestion du projet/ Gant Chart

11 Merci de votre écoute