Complexes TCR/CD3 Kuhns MS. et al.Immunity 24 : (2006)

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4 Complexes TCR/CD3 Kuhns MS. et al.Immunity 24 : (2006)

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12 Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466

13 Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466

14 Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466
Conformation des peptides trouvés dans les molécules de classe Ia Conformation des peptides trouvés dans les molécules de classe II

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28 Enzymes impliquées dans la Jonction des extrêmités
non homologues : Non Homologous End Joining (NHEJ) Ku 70 et KU 80 forment des hétérodimères qui possèdent des activités leur permettant de fixer les extrêmités de DNA. 2) Ku70/Ku80 s’associe à la sous-unité catalytique d’une protéine Kinase, DNA-PKcs pour former la protéine kinase dépendante du DNA. 3) Artémis qui est une nucléase et la DNA-PK jouent un rôle essentiel dans la formation des jonctions codantes. 4) XRCC4 et DNA ligase IV sont impliquées dans la ligation des jonctions codantes et des séquences de recombinaison (RSS). SCID = severe combined immune deficiency Exemple : souris ayant une mutation de l’enzyme DNA-Protein Kinase

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33 Absence de mutations somatiques dans les régions variables des chaînes alpha et beta du TCR

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35 Diversité des récepteurs pour l’antigène
Diversité combinatoire : - recombinaison aléatoire entre les segments géniques V(D)J - appariement entre une chaîne a et une chaîne b pour le récepteur des lymphocytes T (TCR)

36 Diversité des récepteurs pour l’antigène
Diversité jonctionnelle : - délétion de nucléotides - addition de nucléotides : dépendante de la matrice (élément P) indépendante de la matrice (élément N): médiée par la Terminale déoxynucléotidyl Transférase (TdT) la TdT est une ADN polymérase atypique puisque elle ne recopie aucun brin matrice Son expression est:  retrouvée dans toutes les espèces de vertébrés  tissu-spécifique (thymus et moelle osseuse)  transitoire au cours de l’ontogénie des cellules B et T ainsi qu’au cours du développement.

37 La technique Immunoscope
ARN ADNc Amplification par PCR BV BJ BD BC Elongation d’une amorce fluorescente * Migration sur un gel dénaturant Analyse 6 7 8 9 10 11 6 7 8 9 10 11

38 Quelle est l’influence de la TdT
L’obtention de souris déficientes en TdT (TdTko) a permis de montrer de façon absolue que seule la protéine TdT est responsable in vivo de l’addition des éléments N. (Gilfillan et coll., Science, 1993, 261: Komori et coll., Science, 1993, 261: ) Quelle est l’influence de la TdT sur la production du répertoire des Lymphocytes Tab ? Cabaniols J.P., Fazilleau N. et al. J.of Exp. Med (2001) 194:

39 Nature du répertoire des lymphocytes Tab
des souris déficientes en TdT (TdTko) Intensité de fluorescence (Unité arbitraire) Taille de CDR3a Taille de CDR3b

40 Extrapolation à la taille du répertoire
La technique Immunoscope II Séquençage exhaustif 6 7 8 9 10 Taille CDR3 Aire (% du total) X % Y Analyse Immunoscope CDR3 Jb Cb Vb Db Amplification par PCR Analyse statistique Extrapolation à la taille du répertoire des Lymphocytes T Répertoire T

41 Au moins 90% de la diversité du TCRab
Conclusion Le répertoire des cellules Tab des souris TdTko est polyclonal. Dans les souris TdTko, la taille du répertoire des TCRab représente 5 à 10% de celle des souris de génotype sauvage. La baisse de diversité n’est pas contre-balancée par un accroissement de l’appariement d’une chaîne b avec plusieurs chaînes a. Au moins 90% de la diversité du TCRab est due à la TdT

42 Quelle est l’influence de la TdT
De façon surprenante, lorsque la déficience en TdT est introduite dans un fonds génétique prédisposant à une maladie autoimmune, elle a un rôle protecteur. (Gilfillan et coll., 1995, Immunol Rev, 148: Conde et coll., 1998, JI, 161: Feeney et coll., 2001, JI, 167: Robey et coll., 2004, JI, 172: ) Quelle est l’influence de la TdT sur le répertoire des cellules T autoréactives ?