Melle: REGUIEG Khadidja 2016/2017. Procéder à un lavage minutieux des mains, avec brossage des ongles avant et après les manipulations, Éviter les ouvertures.

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1 Melle: REGUIEG Khadidja 2016/2017

2 Procéder à un lavage minutieux des mains, avec brossage des ongles avant et après les manipulations, Éviter les ouvertures des fenêtres pendant les manipulations Ouvrir avec précaution les récipients contenant des cultures microbiennes, afin d'éviter toute projection. Flamber, avant et après manipulations, les anses métalliques utilisées pour les prélèvements, Prévenir immédiatement le responsable de TP en cas de bris d'un récipient contenant une culture en cas de contamination accidentelle d'un manipulateur ou tout incident dispersant le matériel microbien Interdiction formelle de boire, manger et fumer pendant les TP Stériliser tout le matériel septique à la fin de la manipulation Prendre toutes dispositions indispensables pour la mise à l'abri des souches microbiennes ainsi que leur destruction afin d'éviter toute contamination.

3 C’est quoi un milieu de culture? Quel sont les différents types des milieux de culture? Comment préparer un milieu de culture?

4 Définition d’un milieu de culture → Environnement artificiel et contrôlé par l'homme pour isoler et étudier les M.O. → Le milieu de culture doit satisfaire les exigences nutritives du M.O étudié ce qui implique : couvrir les besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance, apporter la source de carbone et d’énergie, pH et pression osmotique adéquats

5 L’utilisation des milieux de culture  Isolement  Identification  Conservation (Ces milieux permettent la survie des micro-organismes utilisant un métabolisme ralenti. Il s'agit en général de milieux très pauvres).

6 Les différents types des milieux de culture 1- milieux non sélectifs = ordinaire = général: Milieu minimal pour la croissance des M.O ne contient pas des molécules inhibitrices. Ex: Gélose nutritive ordinaire (Milieu de base qui permet la culture des bactéries non exigeantes) Gélose Sabouraud (isolement des champignons )

7 2- milieux sélectifs: Ces milieux favorisent le développement d’un type (groupe) des MO parmi plusieurs et inhibent les autres Contiennent des agents inhibiteurs ( AB, sel, colorant)

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9 3- milieu d’enrichissement  Ces milieux sont généralement sous forme liquide et ils sont utiliser pour les M.O présents à proportion peut être minime par rapport à celle de la flore commensale ou pour les MO plus exigeants.  Ils contiennent des substances organiques complexes ( sang, extraits de levure). Ex : Le bouillon caséine-soja modifié, appelé par les Anglo-Saxons « modified Tryptone Soy Broth » ou mTSB, est un milieu d’enrichissement utilisé pour la recherche des sérotypes pathogènes d’Escherichia coli, notamment le sérotype O157:H7, dans les produits alimentaires et tous les prélèvements d’origine animale susceptibles d’en contenir. Le bouillon LEB (bouillon d'enrichissement pour Listeria) ou Fraser sont des milieux de culture qui sert à l'enrichissement sélectif des Listeria. Le bouillon de Sabouraud (étude morphologique des levures - contrôles de stérilité)

10 4- milieu spécifique = Différentiel Ces milieux sont utilisés pour l’identification des MO, ils facilitent la distinction entre les colonies présentes sur le même milieu par la mise en évidence des caractères biochimiques. +/- H2S, +/- lactose Dégradation du glucose en +/- de O2

11 +/- utilisation du Mannitol

12 La fluorescence sous UV

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14 King B peptone ………………………………………………………20,0 g Glycérol ………………………………………………..….. 10,0 g K 2 HPO 4 ……………………………………………………..…1,5 g Sulfate de magnésium heptahydraté……1,5 g Agar ……………………………………………………………12,0 g Eau distillée …………………………..…………... 1 000 ml pH = 7,2 Autoclavage 20 min à 121°C Préparation de 250 ml de chaque milieu de culture Gélose nutritive extrait de viande ……………………… 1 g extrait de levure ……………………… 2,5g peptone ……………………………………… 5 g chlorure de sodium …………………. 5 g Agar.............................................. 15 g Eau distillée ………………………... 1 000 ml pH = 7 ± 0.2 Autoclavage 20 min à 121°C

15 Matériel nécessaire  Les ingrédients du milieu  4 Béchers 250 ml et 500 ml  Barreau magnétique  1 litre de l’eau distillée  Une balance électronique  4 flacons de 250 ml Préparation de 250 ml de chaque milieu de culture

16 Préparation des échantillons à tester