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Publié parsoumaya kouki Modifié depuis plus de 6 années
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Optimisation et Validation d’Un Procédé de Dosage de Tétracycline Présentant dans Les Viandes Optimisation et Validation d’Un Procédé de Dosage de Tétracycline Présentant dans Les Viandes Réalisé par : Khallouli khouloud Balti Islem khalloulikhouloudkh@gmail.com Encadrée par: Hbaieb Bouchaira Souhaira 1 Présentation de le mémoire de Projet de Fin d’Etudes Initiation á méthodologie d’enseignement et de recherche
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Objectifs Optimisation des conditions optimales pour doser les tétracyclines Extraction des tétracyclines a partir des viandes Dosages des tétracyclines par HPLC et valider ces critères. 2
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Problématique Quels sont les propriétés physicochimiqu es des tétracyclines ? Quelle est la méthode adéquate pour extraction des tétracyclines principalement dans les viandes ? quels sont les critères d’optimiser et valider le tétracycline? 3
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plan Optimisation de la méthode utilisée Etude bibliographique Validation analytique Conclusion et perspectives Introduction 4
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5 Année 50 Laboratoire Pfizer Médicine humaine Vétérinaire
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Etude bibliographique 6
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Un antibiotique Substance semi- synthétique obtenue par modification d’une molécule naturelle substance chimique synthétique 7 C’est quoi un antibiotique ? substance naturelle élaborée par des micro- organismes
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8 Détruit la membrane bactérienne Bloque la genèse protéique Inhibe la synthèse du paroi bactérien Un antibiotique Freine la duplication de l’ ADN Mode d’action
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Tétracyclines Des agents a large spectre 9 Parasites protozoaires mycoplasmes son activités contrent Une large gamme de bactérie : Gram+ gram- Tétracyclines:
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10 Bloque la liaison d’amminoacyl- ARnT au site accepteur Inhibe le complesse ARNm- ribosome Empêche Synthèse des protéines Mode d’action de tétracycline
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des bases faibles à cause du groupement diméthylamino Formule brute : C 22 H 24 N 2 O 8 Bonne stabilité à l’état solide, mais perte d’activité en milieu aqueux Propriétés des tétracyclines Molécules instables dans l’eau 11
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12 Élimination métabolisme distribution Propriétés pharmacologiques
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Une douleur abdominale Des infections à levures vaginales Diarrhée Nausée et des vomissements Les effets secondaires 13
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Les effets indésirables Une grossesse Une allergie Une réduction importante de la fonction rénale 14
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Les différentes structures des tétracyclines est décrite ci-dessous 15
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La Chromatographie Liquide à Haute Performance 16 Utilisée en chimie analytique grâce à : Rapidité Haute résolution Simplicité
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17 Appareillage d’une chaine HPLC Injecteur Pompe Ordinateur Colonne Détecteur +
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Extraction 18
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19 Extraction par Tampon Déprotonisation par TCA Centrifusage des extraits puis filtration par papier Purification par SPE sur cartouche C18 Etapes d’extraction des tétracyclines a partir des viandes
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Comparaison avec échantillon de contrôle Elution par methanol La détection des analytes se fait par LC-MS La séparation chromatographi que se fait sur une colonne C18 l’éluat récolté est évaporé à sec et repris dans l’eau l’éluat récolté est évaporé à sec et repris dans l’eau 20
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21 HPLC/MS
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LC\MS Température du four à colonne : 30°C Les conditions chromatographiques LC\MS 22 Volume d’injection : 10 µl Température de l’autoinjecteur : 10°C Phase moblile : MeOH /ACN
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Optimisation 23
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Paramètres d’optimisation Longueur d’onde Phase mobile Le débit Température de colonne 24
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25 Débit de phase stationnaire température colonne Phase mobile Optimisation
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26 phase mobile Acide oxalique Méthanol Acétonitrile
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27 Le temps de rétention du débit le plus faible est optimisé pour le dosage Mesure les temps de rétentions différentes valeurs du débits Choix de débit
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28 Le temps de rétention du Température le plus faible est optimisé pour le dosage Mesure les temps de rétentions différentes valeurs du Température Choix de Température
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Phase mobile: Acide oxalique, méthanol Acetonitrile Volume d Injection : 20 µl Débit : 1ml/mn COLONNE :Chromolith ® Performance (100 mm*4,6 mm) Diamètre des particules 2µm T: ambiante, durée d’analyse =20minutes Détection ultraviolette UV, λ = 355 nm Conditions chromatographique 29
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Validation 30
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31 Phase mobile Injection des solutions dans les conditions chromatographiques précitées S1 Etude de la spécificité: Solution à examiner C solvant HCL =C1
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Chromatogramme de la phase mobile Chromatogramme du tétracycline Bonne séparation La méthode est spécifique 32 Chromatogramme de solvant
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Une série de solutions du tétracycline 33 Etude de la linéarité: Mesure Aires=f(cº) Pour 3 jours La droite de régression est linéaire Coefficient de corrélation R R moy > 0,995
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34 Solution 100% Répétabilité Reproductibilité Même jour 7 injections 3 jours 18 injections 6 injections par jours Etude de la fidélité: RépétabilitéCV<2%ReproductibilitéCV <2%
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Etude de l’exactitude: 35 Recouvrement moyen = 100 % CV moyen < < 2% C(ug/mL ) % tetracycline
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36 Préparation d’une gamme de concentration croissante Dilutions successives a partir de la concentration nominale Détermination des limites de détection et de quantification LD & LQ T1T1 T4T4 T3T3 T2T2 T5T5
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Chromatogramme du T3 Chromatogramme du T5 Chromatogramme du T4 37
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C T3 < LD < C T4 À l’aide des équations : 38 et
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39 La réalisation de cette extraction et validation, exige tout de même que Tous les résultats obtenus sont conformes Conclusion
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40 Perspectives y-a il d’autres méthodes pour valider le tétracycline avec absence de risque et a des résultats plus performants ?
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