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INSERTION DU GENE GFP DANS DES BACTERIES GROUPE III
Camille Roger, Emma Castel, Daniela Camargo, Kelly Blasco, Sandrine Rivrain, Christophe Le Gros, Laurent Esnault, Boris Guédel, Ciprian Davidescu.
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I. Transformation Objectifs : ajout du plasmide contenant le gène GFP à une bactérie. bactérie Gène codant pour la GFP Gène de résistance à la Kanamycine ADN plasmidique
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II. Ensemencement Témoins Échantillons Objectifs : culture de bactéries transformées et non transformées. L'échantillon T absence de colonies sur milieu avec Kana. Ne correspond pas au témoin. Conclusion : problème au niveau de la transformation. Transformation des bactéries à refaire. T+K + IPTG T NT+K NT
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Deuxième culture bactérienne
Témoins Echantillons T+IPTG+K T+IPTG Conclusion : expérience réussie. Les bactéries que nous souhaitions transformer se sont développées dans un milieu avec kanamycine, elles ont incorporé le plasmide : transformation réussie. T+IPTG T+K NT+K NT
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III. Isolation et purification du plasmide
Objectifs : récupération du plasmide présent dans les bactéries transformées.
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IV. Double digestion Objectifs : séparation du gène GFP de l’ADN plasmidique. On effectue cette séparation grâce aux enzymes Hind III et Bam H1. gène de résistance à la Kanamycine
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V. Électrophorèse Objectifs : vérification de la présence du gène de la GFP dans le plasmide et du fonctionnement des enzymes. Principes: Le gel d’agarose permet de différencier les fragments d’ADN selon leur taille.
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Résultats de la première l’électrophorèse
Plasmide digéré Plasmide non digéré Bactéries non transformées Marqueur de poids moléculaire
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Résultats de la seconde électrophorèse
Marqueur de poids moléculaire H B H B H B B HB HB HB HB Gène GFP Simple digestion avec Bam H1 Simple digestion avec Hind III Double digestion
