Guyslain TSHUY Biologiste médicale. Introduction Analyse macroscopique Analyse cytologique Analyse biochimique et types de LCR. Rendu résultat Guyslain.

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1 Guyslain TSHUY Biologiste médicale

2 Introduction Analyse macroscopique Analyse cytologique Analyse biochimique et types de LCR. Rendu résultat Guyslain TSHUY///3/ 2019

3 Problème collectif et individuel Guyslain TSHUY///3/ 2019

4 1. Problème collectif * Méningocoque sérogroupes A, C et W135: 1. épidémies meurtrières 2002: 1°épidémie au Burkina Faso: 11899 cas 1368 décès 2005: 1 160cas 256 décès 2003 épidémies au Niger (8283 cas/669 décès) et au Burkina Faso (8474cas/1312 décès). Intrication de A et W135 RDC 2016: 3 359cas, 2010: 1 941cas. Afrique sub-saharienne /nov à juin Guyslain TSHUY///3/ 2019

5 2. Problème individuel * Méningites à pneumocoque Haemophilus influenzae * Méningites néonatales : - Escherichia coli K1 - Streptocoque B - Listeria monocytogenes * Méningites de l’immunodéprimé - Cryptococcus neoformans - Autres Guyslain TSHUY///3/ 2019

6 * Méningite: inflammation des méninges due à l’envahissement du Liquide Céphalorachidien par un agent pathogène Guyslain TSHUY///3/ 2019

7 * Mode de contamination du LCR: 1. Hématogène : oropharynx → sang → LCR 2. Contiguïté : sinusite 3. Traumatisme: chirurgie Hématogène Contiguïté Guyslain TSHUY///3/ 2019 Traumatisme

8 * Réaction immunitaire: * Leucocytes : - Lympho si Virus - PN Neutro si bactéries - Protéinorachie - Glycorachie si bactérie Guyslain TSHUY///3/ 2019

9 L’examen cytochimie du LCR permet de reconnaître ou de suspecter une étiologie bactérienne justifiant un traitement antibiotique immédiat. Schématiquement: A. Méningite communautaire. B. Méningite nosocomiale Guyslain TSHUY///3/ 2019

10 * La fréquence respective des différentes espèces bactériennes est en fonction de l’âge: - Adultes et enfants de plus de 5 ans - Nourrissons et enfants de moins de 5 an - Nouveau-nés Guyslain TSHUY///3/ 2019

11 * Par rapport aux tranches d’âge, les germes suivant sont isolé: Adultes et enfants > 5 ans: - S. pneumoniae, - N. meningitidis, - Listeria monocytogenes Nourrissons et enfant < 5 ans: - S. pneumoniae - N. meningitidis - H. influenzae Nouveau-né: - Streptococcus agalactiae,- Escherichia coli,- Listeria monocytogenes Guyslain TSHUY///3/ 2019

12 * Les méningites nosocomiales peuvent survenir chez des malades immunodéprimés ou des malades de neurochirurgie et être en relation avec un traumatisme ou un acte technique. - Staphylococcus aureus ou epidermidis - Streptococcus pneumoniae - Enterobacteriaceae - Pseudomonas et apparentés Guyslain TSHUY///3/ 2019

13 1. Prélèvement :  Sujet penché en avant ou en décubitus latéral Asepsie rigoureuse (povidone iodée) Gants stériles, Cul de sac dural : L4-L5 ou L5-S1 Aiguille avec mandrin ou IM LCR Guyslain TSHUY///3/ 2019

14 1. Prélèvement :  La qté moyenne est 3 ml. L’acheminement au labo se fera en moins de 30 min, en raison de la lyse rapide des polynucléaires (jusqu’à 50 % en 2 heures), et à l’abri du froid en raison de la fragilité de certaines bactéries, notamment les méningocoques. Guyslain TSHUY///3/ 2019

15 * LCR peut présenter les aspects ci- après: - Limpide - Citrin - Légèrement trouble - Trouble - Hémorragique Guyslain TSHUY///3/ 2019

16 * Le LCR est utilisé directement pour l’analyse biochimique et la numération des éléments. * La numération des éléments est effectuée dans une cellule de Nageotte ou une cellule de Malassez. * FL difficile moins de 10 éléments Guyslain TSHUY///3/ 2019

17 * Il existe différents types d'hématimètres. Ici, on ne parlera que de ceux de type Malassez. Ces hématimètres diffèrent par leur quadrillage, mais tous deux permettent d’ énumérer, dans un volume précis et connu, tous les éléments visibles à l'objectif 40. * Il existe maintenant des cellules de comptage à usage unique, en plastic. Exemple: Cellule de Malassez Guyslain TSHUY///3/ 2019

18  Choix n'a pas une importance réelle : Il dépend surtout de l'habitude de l'opérateur.  Cellule de Malassez Volume du quadrillage total : 1 µl Dimensions d'une bande : L : 2,5 mm, l : 2 mm, H (ou profondeur) : 0,20 mm Constitué de : 100 rectangles d'égales surfaces Guyslain TSHUY///3/ 2019

19 * Comment effectuer la lecture avec ces deux cellules:  Cellule de Nageotte V=1,25µl, N= nbre elt compté Lire ds 4 bandes (4X1,25= 5µl) N= n/5 ex: 76 elts cpté ds 4 lig. 76/5= 15,2µl  Cellule de Malassez V= 1µl N = nbre élément compté N= n/V Exemple: élément compté 26. N= 26/1= 26µl ou N= 26 Guyslain TSHUY///3/ 2019

20  Cellule de Malassez V= 1µl N = nbre élément compté Exemple: élément compté 26. N= 26/1= 26µl ou N= 26 N= n/V Volume T: 1 µl Dimensions d'une bande : L : 2,5 mm, l : 2 mm, Hauteur: 0,20 mm Constitué de : 100 rectangles d'égales surfaces Guyslain TSHUY///3/ 2019

21 N= n/V 14 éléments

22 On mélange avant la lecture On mélange avant la lecture On sédimente avant la lecture SangLCR et autres liquides Urines Unité/µl, mm3, L Unité/µl, mm3, mL Estimation/Champ est imprécise Guyslain TSHUY///3/ 2019

23 * Pour obtenir une numération proche de la réalité, il est important de :  Ne pas rayer le quadrillage lors du nettoyage de l'hématimètre ;  Bien monter la lamelle sur l'hématimètre ;  Déposer la goutte de l’échantillon à énumérer correctement, comme décrit ci-dessous ;  Bien laisser sédimenter les particules à énumérer avant le comptage. Guyslain TSHUY///3/ 2019

24 * Se rassurer que la lamelle couvre objet est correctement bien déposée. Ceci permet de respecter la Hauteur. * Se rassurer également que la zone est correctement bien remplie avec le produit à traiter. Guyslain TSHUY///3/ 2019 H

25 * Permet de reconnaître les catégories suivantes: LCR normal, purulent, lymphocytaire, panaché, hémorragique et d’orienter vers une étiologie bactérienne ou virale. Il est à noter que la formule leucocytaire est irréalisable en dessous de 10 éléments cellulaires par mm3 et difficilement réalisable en dessous de 20. Guyslain TSHUY///3/ 2019

26 * Aspect macroscopique : « eau de roche » * Moins de 5 éléments/µL * Protéinorachie : < 0,4 g/l * Glycorachie normales: >60% de la glycémie. * Chlorurorachie: 120-130mmol/l (peu informatif, tend à être abandonné). NB : chez le nouveau-né : 10 à 30 éléments /µL (50 % de polynucléaires neutrophiles). Guyslain TSHUY///3/ 2019

27 * L’aspect est trouble ; ce caractère apparaît à partir de 200 globules blancs par mm3 * Plus de 10 éléments/mm3 dont plus de 50 % de polynucléaires. - Protéinorachie > 0,40 g/l. - Hypoglycorachie < 40 % de la glycémie. * La méningite est à considérer comme bactérienne Guyslain TSHUY///3/ 2019

28 - Plus de 10 éléments/mm3 dont plus de 50 % de lymphocytes. – Protéinorachie > à 0,4 g/l. - Si hypoglycorachie < 40 % de la glycémie : Etiologie bactérienne probable: Listeria, BK: accompagné d'une hypochlorurorachie. - Si normoglycorachie > 50 % de la glycémie et moins de 100 éléments/mm3 : Etiologie virale probable. Guyslain TSHUY///3/ 2019

29 - Plus de 10 éléments/mm3 ; égalité PNN/lymphocytes. - Protéinorachie et glucorachie normales. Ce peut être : une listériose, une méningite purulente ou une méningite lymphocytaire au début, un abcès cérébral. Guyslain TSHUY///3/ 2019

30 * La contamination par les GR: un traumatisme lors de la ponction lombaire hémorragie sous arachnoïdienne Conséquence: Hypoglucorachie Fausse augmentation Protéinorachie = 1000 GR augmente la Protéinorachie de 0,1 g/l. Guyslain TSHUY///3/ 2019

31 o La technique d’agglutination de particules de latex sensibilisées est généralement utilisée. Les antigènes recherchés sont choisis en fonction de l’orientation diagnostique. o Méningite communautaire de l’adulte ou de l’enfant: - Cocci à Gram positif : S. pneumoniae - Bacilles à Gram négatif : H. influenzae - Cocci à Gram négatif : N. meningitidis o Méningite du nouveau-né: - Cocci à Gram positif : S. agalactiae - Bacilles à Gram négatif : E. coli K1 o Méningite lymphocytaire de l’immunodéprimé (SIDA) - Cryptococcus neoformans Guyslain TSHUY///3/ 2019

32 * Non, pas avec trop de précipitation !!! * Bien que c’est une urgence. * Aves-vous vérifier correctement ce que vous venez de faire?

33 * Prenez toujours votre temps pour bien vérifier ce que vous venez de réaliser, même si c’est une urgence. * A savoir que votre décision diagnostique est très capitale pour la survie de votre patient. * Prenez toujours l’habitude de revoir vos notes, pour se rassurer de votre authenticité sur l'exécution de procédure.

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