Présentation : Synthèse du PHB

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1 Présentation : Synthèse du PHB
Evreux meeting

2 Premierement deux solutions sont introduitent dans le fermenteur.
Solution A Pour 1 litre de solution (grammes) Urée (1,0), Extrait de levure(0,16), KH2PO4 (1,52), Na2HPO4 (4,0), MgSO4∙7H2O (0,52), CaCl2 (0,02), Glucose (40) Solution B Pour 1 litre de solution (grammes) ZnSO4∙7H2O (0,13), FeSO4∙7H2O (0,02), (NH4)6Mo7O24. 4H2O (0,06) H3BO3 (0,06) Evreux meeting

3 Premierement deux solutions sont introduitent dans le fermenteur.
Solution A Solution B 2 mL de culture 200 mL 20 µL Evreux meeting

4 Mettre le fermenteur dans un bain Marie
Evreux meeting

5 Le bain Marie. Vitesse de rotation. (ajuster au minimum) Régulateur
Bas 36°C Haut 38°C Agitateur. Inserrer l’agitateur dans le Fermentateur. Evreux meeting

6 Mélanger le fermentateur a 37°C durant 45 heures.
Evreux meeting

7 Sortir le fermenteur du bain Marie.
Après 45 heures: Sortir le fermenteur du bain Marie. Laisser décanter 15 minutes. Extraire doucement 150 mL du surnageant avec une pipette. Le reste est centrifugé (15 min a rpm) Evreux meeting

8 Après la centrifugation:
Garder le solide dans les tubes (éliminer le surnageant) Ajouter au solide 10 mL de hypochlorite de sodium. Incuber le mélange a 60 °C durant 45 minutes. 10 mL Evreux meeting

9 Le mélange est centrifugé à 5000 rpm pendant 10 min .
Après centrifugation: Garder le solide dans le tube (éliminer le surnageant) Laver avec 5 mL d’eau distillée. Centrifuger le ménage pendant 5 minutes. 5 mL Evreux meeting

10 Après centrifugation:
Garder le solide dans le tube (éliminer le surnageant) Laver avec 5 mL d’acetone. Centrifuger le ménage pendant 5 minutes. 5 mL Evreux meeting

11 Après la centrifugation:
Garder le solide dans le tube (liminer le surnageant) Laver avec 5 mL de methanol. Centrifuger le ménage pendant 5 minutes. 5 mL Evreux meeting

12 Après la centrifugation:
Garder le solide dans le tube (liminer le surnageant) Transférer le solide dans une boite de Pétri. En dessous la hotte d’aspiration, mesurer 5 mL de chloroforme. L’introduire dans une boite de Pétri. 5 mL Evreux meeting

13 Agiter le mélange avec des mouvements rotatif.
Mettre la boite de Pétri sous l’entonnoir retourné qui est connecté avec le système Venturi. Agiter le mélange avec des mouvements rotatif. Evreux meeting

14 Quand le chloroforme est entièrement évaporé:
Vous pouvez retirer le film platisque: Evreux meeting