Thème : Les caractéristiques du Cancer

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1 Thème : Les caractéristiques du Cancer
La migration des cellules cancéreuses BLACHE Kévin, ARMOIRY Manon, CHWIEJ Karen, EMOND Amandine, POURROY Roxanne Lycée Aristide Briand GAP 05

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3 Problématique : Comment les cellules cancéreuses parviennent-elles à envahir les tissus voisins ?
La modification d’un gène peut-il avoir une incidence sur la migration des cellules ? Que produisent les cellules pour traverser la matrice extracellulaire ?

4 Mise en évidence de la migration des cellules par blessure/cicatrisation
Hypothèse 1 : La modification du gène Cdx1 a une incidence sur la migration des cellules ? Expérience 1 : Test de blessure-cicatrisation Cellules témoins Cellules CDX1 Monocouche cellulaire

5 Blessure, lavages puis incubation
Milieu nutritif + Antiprolifératif : mitomycine (surnageant ) Blessure puis 5 lavages PBS Cellules Incubation des plaques pendant 6h à 37°C.

6 Résultat du test de migration
CAT: cellules contrôles 6h Cellules CDX 1 6h Grossissement x40

7 Morphologie des cellules avant et après migration.
Cellules témoins Incubation de 6h Cellules CDX1 Incubation de 6h

8 Vitesses de migration des cellules
µm/min Cellules CDX1 1.5 fois plus rapides que les cellules contrôles !

9 Mise en évidence d’enzymes permettant la migration
Hypothèse 2 : c’est grâce à des enzymes libérées par les cellules qu’elles traversent la matrice extracellulaire. Expérience 2 : Zymographie 1. Séparation des protéines en fonction des masses molaires 2. Mise en évidence de l’activité enzymatique

10 Préparation des gels de concentration et de séparation
Gel de concentration : Acrylamide Gel de séparation : Acrylamide et gélatine Gel de concentration Gel de séparation

11 Électrophorèse 1 2 3 4 5 6 7 Gel de concentration Gel de séparation
Légende : 1. Marqueurs masse molaire. 2. Test positif MMP-2. 3. Test négatif milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales. 5. Sn cellules tumorales invasives. 6. Sn cellules CDX1. 7. Surnageant (sn) cellules contrôles. 1 2 3 4 5 6 7 Gel de concentration Gel de séparation

12 Traitement des gels Séparation des gels de concentration et de séparation . Lavages du gel de séparation avec une solution de triton/CaCl2. Incubation 18h à 37°C avec une solution de travail dont la concentration en triton est inférieure à la première. Coloration des gels pour observer la gélatine consommée par les enzymes (noir amido et rouge ponceau).

13 Résultat après coloration
1. Marqueurs masse molaire. 2. Test + MMP-2. 3. Test - milieu seul. 4. Sn cellules non tumorales. 5. Sn cellules tumorales invasives. 6. Sn cellules CDX1. 7. Sn cellules contrôles.

14 Interprétation des résultats
Apparition d’une décoloration pour l’enzyme MMP-2 => Dégradation de la gélatine. Apparition de deux taches blanches pour les cellules tumorales => Deux enzymes différentes Cellules CDX1, absence de trace => Quantité d’enzymes insuffisante.

15 Conclusion Sous l’influence d’un gène modifié => accélération de la migration. Production de différentes enzymes pour dégrader la matrice extracellulaire dans les cellules tumorales invasives (mais pas de mise en évidence pour les CDX1). Perspectives : pourrions nous supprimer ces enzymes pour limiter l’invasion des cellules cancéreuses ? Comment le mettre en œuvre ?