Acides nucléiques: structure propriétés physico-chimiques

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1 Acides nucléiques: structure propriétés physico-chimiques
CHMI 2227F Biochimie I Acides nucléiques: structure propriétés physico-chimiques CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

2 Acides nucléiques CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

3 Hershey et Chase L’expérience du Waring blender…
32P seulement dans les acides nucléiques 35S dans les protéines seulement (Met/Cys) CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

4 Nature des acides nucléiques 1. bases azotées
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

5 Nature des acides nucléiques 2. sucres
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

6 Nature des acides nucléiques 3. nucléosides
H Deoxyadenosine Lien glycosidique 1’ 9 1 Cytidine CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

7 Nature des acides nucléiques 3. nucléosides
Purines Base DNA RNA Adénine Déoxyadénosine Adénosine Guanine Déoxyguanosine Guanosine Pyrimidines Base DNA RNA Cytosine Déoxycytidine Cytidine Thymine Déoxythymidine - Uracile Uridine CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

8 Nature des acides nucléiques 3. nucléosides
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

9 Nature des acides nucléiques 4. nucléotides
Guanosine 5’monophosphate Déoxythymidine 5’triphosphate Alpha a Beta b Gamma g CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

10 Nature des acides nucléiques 4. nucléotides
Nombre de groupes phosphates Déoxynucléotide/Nucléotide 1 Déoxyadenosine-5’-monophosphate 2 Déoxyguanosine-5’-diphosphate 3 Adénosine-5’-triphosphate CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

11 Nature des acides nucléiques 5. les polynucléotides
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

12 Nature des acides nucléiques 5. les polynucléotides
a b g CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

13 Nature des acides nucléiques 6. Les règles de Chargaff
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

14 Structure des acides nucléiques 1. ADN
bases Squelette sucre-phosphate CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

15 Structure des acides nucléiques 1. ADN
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D. 1 Å (Ångstrom) = 0.1 nm = 1 x m

16 Structure des acides nucléiques 1. ADN
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

17 Structure des acides nucléiques 2. Duplex ARN/ARN et ADN/ARN
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

18 Structure des acides nucléiques 2. Duplex ARN/ARN et ADN/ARN
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

19 Structure des acides nucléiques
Java applets: CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

20 ADN: Absorbance CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

21 Dénaturation de l’ADN CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

22 Dénaturation de l’ADN DNA#1 DNA#2 Hyperchromicité
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

23 Dénaturation de l’ADN G+C-rich A+T-rich
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

24 Hybridation CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

25 Électrophorèse en gel d’agarose
+ - Power ADN Microscopie électronique à balayage d’un gel d’agarose (1×1 µm)  • L’agarose est un polymère poreux qui permet le mouvement des molécules d’ADN CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

26 Électrophorèse en gel d’agarose
Molécules d’ADN De longueur connue Courbe standard: Log longueur vs distance migrée Staining with ethidium bromide Le bromure d’éthidium fluoresce rouge seulement lorsqu’il s’intercale entre les paires de bases. Électrophorèse en gel d’agarose CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

27 Analyse Southern et Northern
Une sonde d’acide nucléique marquée au 32P n’est complé-mentaire qu’à une seule des molécules d’ADN présentes sur le gel Hybridation CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

28 Analyse Southern ADN génomique coupé avec
une enzyme de restriction Allèle différente des autres? CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

29 FISH Fluorescent in-situ hybridization
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

30 Puces à ADN RNA labeling 1000’s of genes
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

31 Dénaturation de l’ADN CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

32 Dénaturation de l’ADN CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

33 Le paradoxe de la valeur C
CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

34 Le paradoxe de la valeur C
Sauterelle Podisma pedestris Mouche à fruits Drosophila melanogaster 18,000 Mb 180 Mb kbp CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

35 Le paradoxe de la valeur C
Single copy Moderately repeated Highly repeated CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

36 Le génome humain Génome humain 3000 Mb
Gènes et autres séquences apparentées 900 Mb ADN extra-génique 2100 Mb ADN codant 90 Mb ADN non-codant 810 Mb ADN répété 420 Mb ADN à copies uniques/faible nombre de copies 1680 Mb Pseudogènes Fragments de gènes Introns, etc Répétitions en tandem Répétitions intercalées (« interspersed ») ADN satellite ADN minisatellite ADN microsatellite Éléments LTR Éléments SINE Éléments LINE Transposons CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.

37 Le génome humain CHMI E.R. Gauthier, Ph.D.