Automatisation de l’hémogramme

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1 Automatisation de l’hémogramme
Automate ADVIA 70 (Bayer)

2 Automate ADVIA 70 (Bayer)
Technologie : variation d’impédance et détection optique 22 Paramètres WBC, RBC, HB, HCT, MCV, MCH, MCHC, RDW NEUT, LYMPH, MONO, EOS, BASO PLT, MPV, PCT, PDW Volume échantillon : 180 mL Durée cycle : 52 sec Nombre d’échantillon/heure : 70 Parameters Precision (CV) Linearity Range WBC 2.0% 0.1 – 99.9 x 103/µL RBC 1.2% 0.02 – 9.99 x 106/µL HB 1.0% 1.5 – 22.5 g/dL MCV 30 – 150 fL PLT 3.0% 10.0% 100 – 1,999 x103/µL 10 – 99 x 103/µL

3 Les avantages/inconvénients
Rapidité d’exécution et accélération du rythme des réponses aux cliniciens Meilleure précision et meilleure reproductibilité Confort du technicien (500 à 1000 hémogrammes/jour dans certains labo) Coût des appareils et de l’entretien Calibration et contôles réguliers et rigoureux Coût humain ?

4 Principes utilisés La détection volumétrique La détection optique
Combinaison des deux

5 Détection volumétrique
Inventé par Wallace Coulter en 1948 Numération / discrimination par seuil/ correction /construction d’histogrammes

6 Détection volumétrique : résultats
1- Numération des GR/plaquettes et discrimination par seuil volumétrique 2- Numération des GB après lyse des GR 3- Dosage de l’hémoglobine par méthode colorimétrique 4- Calculs : hématocrite, CCMH, TCMH 5- Alarmes : agrégats plaquettaires, érythroblastes… fL fL 2-20 fL Altération des de la morphologie des GB WBC,LY,MO,GR RBC,HGB,HCT,MCV,MCH,MCHC,RDC PLT,PCT,MPV,PDW

7 Particule doit être sphérique
Détection optique Particule doit être sphérique Détecteur Source Diluant Echantillon Lentille Filtre Petit angle (1-6°) Diffraction TAILLE Grand angle (8-20°) Diffusion (réfraction) Contenu cellulaire L’interruption du faisceau : comptage des particules La diffraction et la diffusion : taille et contenu cellulaires

8 Trois paramètres mesurés
Détection optique Trois paramètres mesurés nombre, taille, contenu Diagramme à 3 dimensions Projection Contenu Nombre Taille

9 Analyse des Globules rouges
Contenu cellulaire analysé l’hémoglobine Nuage de répartition taille =f(Hb) Répartition GR =f(V) : normocytose, microcytose ou macrocytose Répartition GR =f(Hb) : hypochrome ou hyperdense CV-GR : degré d’anisocytose Calcul de TGMH et CCMH

10 Analyse des Globules blancs
Contenu cellulaire analysé : les myélopyroxydases enzymes contenus dans les granulations primaires azurophiles des polynucléaires et de leurs précurseurs Sang (12 ml) Lyse des GR Réaction peroxydasique Chromogène + substrat Lymphocytes : Monocytes : Neutrophiles : Eosinophiles : - + +++ ++++

11 Analyse des Globules blancs
Nombre LUC N Mo PEROX Taille L E débris Lymphocytes hyperactivés, blastes, plasmocytes, prolymphocytes LUC (large unstained cells)

12 Lyse des GR, plaquettes, leucocytes
Analyse des noyaux Canal baso-lobularité Sang (12 ml) Lyse des GR, plaquettes, leucocytes Sauf les BASO Densité chromatinienne Degré de segmentation Analyses Baso Monolobés Polylobés Blastes