Avignon Transvir Jan. 2008 1 Propriétés biochimiques d’eIF4E importantes pour le cycle viral ? Fixation à la coiffe ? Fixation à eIF4G ? Résidus de surface.

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1 Avignon Transvir Jan. 2008 1 Propriétés biochimiques d’eIF4E importantes pour le cycle viral ? Fixation à la coiffe ? Fixation à eIF4G ? Résidus de surface proches des mutations naturelles ? ►Mutagenèse dirigée de 14 aa d’eIF4E° (allèle de sensibilité)

2 Avignon Transvir Jan. 2008 2 Propriétés biochimiques d’eIF4E importantes pour le cycle viral ? Fixation coiffe Acides aminés proches des mutations naturelles et exposés à la surface Fixation eIF4G

3 Avignon Transvir Jan. 2008 3 Fonctionnalité des formes mutantes d’eIF4E ? Pour la traduction des ARNm ? –Tests biochimiques in vitro fixation coiffe, fixation eIF4G –Traduction cellulaire chez la levure Pour l’infection virale ? –Tests de complémentation fonctionnelle chez la laitue

4 Avignon Transvir Jan. 2008 4 Rôle des acides aminés en surface ? ► Acide aminé F65 de surface, (zone interaction avec VPg ou autre protéine virale?) important pour le cycle viral 4E°F65AR82L 4E ° F65A R82L F65A R82L 4E° C- + + + Fixation Coiffe + + - - Complémentation traduction chez la levure Accumulation virale

5 Avignon Transvir Jan. 2008 5 Mesure spectrométriques des interactions de eIF4E avec m7GTP et Vpg Méthodologie : analyse des perturbations de fluorescence d’eIF4E au contact d’un ligand.

6 Avignon Transvir Jan. 2008 6 Dissociation constants of the surface mutants with their ligands. eIF4E formKd x 10 6 mol/L, m 7 GTP Kd x 10 6 mol/L, VPg-0 Ls-eIF4E°0,25  0,010,27  0,03 R82L0,41  0,031,28  0,07 F65A0,75  0,052,41  0,14

7 Avignon Transvir Jan. 2008 7 Modélisation moléculaire des perturbations de surface induites par les mutants F65A VPg, Ka/10 Y113 F65 F112 m7GDP C A65 Y113 F112 m7GDP D A65 BA F65

8 Avignon Transvir Jan. 2008 8 Complémentation fonctionnelle in planta Sylvie German-Retana Expression et isolement des protéines Bénédicte Doublet, Jocelyne Walter Interactions Sérologie, ELISA Geneviève Roudet-Tavert Spectroscopie, modélisation Thierry Michon Complémentation levure Cécile Lecampion, Christophe Robaglia Sylvie German-Retana Générique de fin Bientôt Transvir le retour ?