Les anaérobies.

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1 Les anaérobies

2 Aspect microscopique Bacilles Gram + présentant une spore
À l’EF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche Spore très résistante, non détruite à 100°C pendant 3 à 5 heures.

3 Classification Elle se fait selon leur habitat, leurs caractères morphologiques et culturaux et leur pouvoir pathogène. On distingue: la flore tellurique: bactéries saprophytes du sol et commensales des cavités naturelles de l'homme et des animaux. Exemple : le genre Clostridium. Règle appliquée pour les conserves industrielles : 10 min à 120°C. la flore de Veillon: bactéries commensales des voies respiratoires, digestives et génitales de l'homme et des animaux et qui ne peuvent survivre dans le sol, non sporulées. Exemples : nombreux genres comme Bacteroides, Peptococcus, Mobiluncus, Fusobacterium.

4 Pouvoir pathogène Clostridium tetani
Forme végétative : bacilles à bouts carrés en chaînettes plus ou moins longues Gram + Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement d’un nouveau Clostridium tetani. Présent dans le sol et les poussières  tétanos

5 Le tétanos est secondaire à l'introduction dans l'organisme de spores de Clostridium tetani consécutive à un traumatisme. Si l'anaérobiose est suffisante (plaies profondes, multiplication de bactéries aérobies associées), les formes végétatives apparaissent par germination des spores. Cependant, la multiplication bactérienne reste localisée à la porte d'entrée, la maladie est uniquement due à la toxine. La toxine, libérée au cours de la multiplication entre par endocytose par les terminaisons nerveuses du site infecté. Elle empêche la libération d'inhibiteurs du motoneurone (glycine, GABA) et provoque une paralysie spastique. (muscle restant en contraction)

6 Clostridium botulinum
Observation microscopique Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large), Gram +, Formant une spore ovalaire terminale déformante. Caractères biochimiques: ANS, glucose +, mobile. Clostridium botulinum est l'agent d'une intoxication alimentaire, le botulisme. La maladie n’est pas due à la bactérie mais à l’ingestion de sa toxine présent dans un aliment mal stérilisé. C’est une toxine thermolabile (sensible à la chaleur), il y a risque de contamination uniquement lors de l’ingestion d’aliments non chauffés. L'intoxication se traduira par une paralysie des muscles lisses essentiellement.

7 Clostridium perfringens
Observation au MEB Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large), Gram +, Formant une spore ovalaire terminale déformante. Responsable de gangrènes gazeuses post-traumatiques, de toxi-infections alimentaires et d'entérites nécrosantes. C'est l'anaérobie le plus répandu dans l'environnement (sol, eau, air, poussières). C'est aussi un commensal des flores de l'intestin, du vagin ou des voies aériennes supérieures de l'Homme et des animaux. Sa présence dans les eaux est un critère de contamination fécale.

8 Angine fuso-spirochétienne de Vincent
Angine ulcéro-nécrotique accompagnée d'une fièvre élevée et d'une réaction ganglionnaire de voisinage. Le diagnostic est bactérioscopique avec la présence d'une bactérie de type Fusobacterium et d'une bactérie de type spirochète. Le traitement de cette angine est simple à base de pénicilline G.

9 Les milieux de culture des Clostridium
Milieu de SCHAEDLER Bouillon trypticase soja 10 g Polytone Sg glucose g Extrait de levure g Tris-hydroxyméthylaminométhane g Hémine 0,01 g L-cystéine 0,40 g ED qsp 1 L Source N et de C, de vitamines Tampon (maintien du pH constant) Facteur de croissance (synthèse des cytochromes) pH = 7,6 Acide aminé, réducteur Ce milieu peut-être : enrichi par addition de vitamine K3. sélectif par addition d'inhibiteurs . solide par addition d'agar : gélose Schaedler. Utilisation: Bouillon ou gélose Schaedler simple: bactéries non exigeantes du genre Clostridium . Bouillon ou gélose enrichi(e): bactéries exigeantes de la flore de Veillon. Milieu de culture utilisé pour les bactéries anaérobies exigeantes : gélose Schaedler + vitamine K3 + sang frais à une concentration de 5%.

10 Milieu de Rosenow cystéine
Composition Peptone trypsique g Extrait de viande de bœuf 3 g Chlorure de sodium g Chlorhydrate de Cystéine 0,3 g Glucose g Indicateur d’Andrade 10 mL (fushine acide dans de l’ED) ED qsp 1 L Source N et de C Sources minérales Acide aminé, réducteur Source énergétique carbonée Indicateur d’oxydo réduction pH = 7,2 Ajouter dans le tube: Un morceau de marbre Un morceau de cervelle de boeuf Ensemencement Régénérer le milieu 20 min au BM à 100°C pour assurer l’anaérobie La présence d’un réducteur renforce l’anaérobie Ensemencer en profondeur le tube en évitant les bulles d’air Recouvrir de paraffine fondue Incuber 24 heures à 37°C.

11 Milieu MRS Composition pH = 6,5 inhibiteur Ensemencement
Peptone trypsique de caséine 15 g Macération de viande mL Extrait de levure 5 g Acétate de sodium 5 g Citrate d’ammonium 2 g Phosphate bipotassique ,4 g Tween mL Sulfate de magnésium ,2 g Sulfate de manganèse ,05 g Glucose g Agar g ED qsp 1 L Source N et de C, vitamines et minéraux, d’acides aminés Inhjbiteurs (concentrations ) Source minérale Apport d’acides gras Sources minérales Source énergétique de C pH = 6,5 inhibiteur C’est un milieu d’isolement sélectif et enrichi des Lactobacillus utilisé pour l’isolement et le dénombrement de ces bactéries dans les produits laitiers. Ensemencement Isolement par la technique des quadrants et incubation sous atmosphère à CO2 .

12 Lecture des milieux Milieu de Rosenow Cystéine
Coloration rose à rouge carmin au niveau de la cervelle  fermentation du glucose Pas de coloration rose  glucose - Décoloration du milieu voir virage au vert  les bactéries sont réductrices Apparition de bulles, décollement de la paraffine  production de gaz par les bactéries

13 Gélose de Schaedler en anaérobiose
Type respiratoire Gélose de Schaedler en anaérobiose Culture sur la hauteur du tube, à l’exception de la surface en contact avec l’O2 de l’air  bactéries ANS. Colonies blanches contours réguliers, bombées,type S  culture sur milieu riche en anaérobiose n° impair: Bacilles Gram -  culture sur milieu riche , bactéries exigeantes faisant partie de la flore de veillon

14 Colonies blanches contours réguliers, bombées, type S  culture sur milieu riche en anaérobiose
n° pair: Bacilles Gram + sporogène  bactéries faisant partie de la flore tellurique.

15 Gélose MRS Petites colonies blanches  caractéristiques des Lactobacillus Culture sur les boîtes mises en anaérobiose et sous atmosphère à CO2  bactéries cultivant en absence d’O2 nécessaire à la fermentation du lactose du lait  production d’acides responsables de l’apparition du caillé.

16 Frottis du yaourt Coques en chaînette Gram +  caractéristiques des Lactococcus Bacilles Gram +  caractéristiques des Lactobacillus La fermentation du yaourt est due à deux types de bactérie provoquant le caillé du lait par production d’acides lors de l’utilisation du lactose.