Mise en évidence de l'activation du lymphocyte

Présentation au sujet: "Mise en évidence de l'activation du lymphocyte"— Transcription de la présentation:

1 Mise en évidence de l'activation du lymphocyte

2 Activation du LT4 à l’aide des anticorps
Anticorps anti-TCR LT4 TCR Anticorps anti-CD4 Protéine CD4 du LT4

3 Protéines phosphorylées
Dans le contrôle positif on a mis des protéines phosphorylées pour être sûr que le test fonctionne. Dans le contrôle négatif on a mis des LT4 non activés. LT4 non activés Protéines phosphorylées Contrôle positif Contrôle négatif

4 Protéine phosphorylée
Cytoplasme du LT4 ATP=ADP+Pi P noyau Protéine phosphorylée Activation du LT4

5 Lyse totale (membrane plasmique+membrane nucléaire) de la cellule avec le tampon de lyse.
ADN Tube

6 Migration des protéines dans le gel d’acrylamide
En chargeant négativement toutes les protéines grâce au SDS, l’électrophorèse va permettre de faire migrer les protéines uniquement en fonction de leur masse. Marqueur de masse moléculaire - CD4 + Gel stacking TCR Gel running

7 Tampon de transfert (nitrocellulose)
Transfert du gel sur nitrocellulose Protéines Tampon de transfert (nitrocellulose)

8 Coloration des protéines par le bleu de coomassie du gel d’acrylamide

9 Mise en évidence des protéines phosphorylées sur la nitrocellulose
Anticorps anti-anticorps anti-phosphoprotéines nitrocellulose Anticorps anti-phosphoprotéines Les seconds anticorps portent une enzyme (péroxidase) qui au contact du substrat

10 Résultats sur le film autoradiographique
CD4 TCR - + PM