Epreuve A Chimie 2014 ASPI – 17 décembre 2015 Claire Bernstein 1 Préparation ASPI - EQE A épreuve 2014

2 Principe de l’épreuve A Le candidat doit tenir pour acquis les faits exposés dans le sujet et se limiter à ces faits. Ne pas remettre en cause les faits. Le candidat doit rédiger une (ou plusieurs) revendications indépendantes offrant au demandeur la protection la plus large possible tout en ayant une bonne chance de succès auprès de l’OEB. Il doit également rédiger des revendications dépendantes, en nombre raisonnable, de manière à y trouver une position de repli si la ou les revendications indépendantes ne sont pas admissibles. Le candidat doit également rédiger un préambule, c'est-à-dire la partie de la description qui précède les exemples ou l'explication des dessins. Ce préambule doit résumer les documents de l’état de la technique. En particulier, le candidat doit examiner s'il y a lieu de mentionner les avantages de l'invention dans le préambule. Si le candidat veut toutefois protéger d'autres inventions en déposant une ou plusieurs demandes de brevet séparées, il doit, dans une note, indiquer clairement les caractéristiques de la revendication indépendante.

3 Logistique Mercredi 2 Mars 2016, de 9h30 à 13h 3h30 heures 2eme jour Stylos, Feutres, Scotch, Ciseaux, Classeur, Perforeuse, Colle, Feuille de couleur.. Feuille en format A4/ A3 avec tableau pré-établi, etc.. Montre, Réveil ‘En-cas’

4 Temps limité: 3h30 Répartition du temps (approximatif) –Lecture rapide du sujet (30-40 min) Identifier les types d’objets susceptibles d’être protégés (produit, composition, procédé / utilisation) Identifier les effets techniques (description et exemples) Relever le vocabulaire indiquant des caractéristiques essentielles (doit, essentiel, faut…), facultatives (habituellement, typiquement, peut..) ou préférentielles. –Analyse de l’invention (2h10-2h30) Objet par objet, déterminer les caractéristiques associées et leur effet éventuel + leur divulgation par l’EDT Rédiger les revendications (>1 h) –Description (20-30 min) Rédaction du préambule (commenter l’EDT, introduire le/les problèmes techniques, présenter l’invention et comment elle résout le/les problèmes techniques) N’ajoutez la description de l’invention (avant les exemples) que si vous avez le temps de l’adapter à la portée des revendications –Relecture (10-15 min)

5 Lettre du client (1/4) [001] Domaine technique : biotechnologie, compositions protéiques Souhait : ne pas payer de taxe de revendication additionnelle => Pas plus de 15 revendications [002] le client souhaite protéger une méthode qui serait connue de D1 Composition avec protéines déjà connues de D2. [003] procédé visant à détecter des solutions dans lesquelles les protéines conservent leur structure naturelle (solutions stabilisantes) Souhaite protéger les solutions stabilisantes obtenues par ce procédé (!) Reach-through claims

6 Lettre du client (2/4) Produit [005] Protéines AB2, AB4, AB5 (EcT et CvT)connu [006] AB5 séchée, AB5 + solution salineconnu [007] AB5 + solution stabilisante Procédé/méthode [008] Méthode pour déterminer la proportion de protéines de type AB5 complexée (fonctionnelle) dans un échantillon: Traitement de l’échantillon par chromatographie sur colonne ([009] CLHP) avec matériel de support = HyPM avec groupes carboxyles libres [009] Ultrahydrogel-250, taille particulaire 6 µm, porosité 250 nm [010] et solution tampon Tris-HCl 200 mM + Na 2 SO 4 100mM, pH 7,2 (mais possible avec pH entre 6,8 et 7,6) [011] Détection AB5 et B5 par spectroscopie d’absorption UV + quantification [012] facteur de stabilité FS = AB5/(AB5+B5)x100, OK si > 70%, de pref > 80%, très pref > 90% [013] Méthode utilisée pour mesurer la stabilité d’AB5 et de tester des solutions stabilisantes

7 Lettre du client (3/4) Produit [014] solution stabilisante = solution aqueuse + agent stabilisateur [015] agent stabilisateur = sucres, détergents, acides aminés Procédé/méthode [013] procédé pour trouver des solutions stabilisantes qui améliorent la stabilité des protéines AB5 [015] méthode de criblage de solution stabilisante qui comprend : Une étape (1) d’incubation de la protéine AB5 dans une solution à tester Une étape (2) de mesure de la stabilité de la protéine AB5 [016] (1) incubation : durée entre heure et mois - Température: basse (4°C) ou ambiante (20- 25°C) - Agitation ou non ; si agitation, la durée peut être raccourcie [017] étape additionnelle éventuelle (3) : test in vivo ou in vitro de l’activité biologique AB5 (connu de l’état de la technique)

8 Lettre du client (4/4) EXEMPLE 1 Stabilité d’AB5 de CvT dans solution saline standard [018] AB5 de CvT obtenue dans commerceconfirme que produit connu EXEMPLE 2 Stabilité d’AB5 de CvT dans diverses solutions et dans différentes conditions [020] solutions testées provenant de kits disponible dans commerceconnues [Tableau 2] Résultats meilleurs pour solutions n°3 (PBS + 0,25% en poids CHAPS) et n°6 (tampon phosphate, pH 7,4, L-arginine 0,4 M) EXEMPLE 3 – essais de stabilisation avec variantes des solutions n°3 et 6 [Tableau 3] Marche pour n°3 tampon phosphate, pH 7,4, L-arginine [50 mM ; 400 mM] n°6 PBS + 0,05%-0,35% en poids CHAPS [023] marche pour tout pH Solution n°3 : L-arginine sup ou égale à 10 mM, pref entre 10 et 50 mM Solution n°6 : CHAPS sup ou égal à 0,05%, pref sup ou égal à 0,15%

9 D1 Méthode d’isolement de la protéine homo-duplex VIP2 [001] VIP2 comprend deux sous unité identiques [004] traitement d’un échantillon contenant un extrait protéinique de VIP2 : [005] par chromatographie sur colonne (HPLC) avec matériel de support = HyPM avec groupes carboxyles libres, Ultrahydrogel-250 [007] taille particulaire 6 µm, porosité 250 nm [006] et solution tampon Tris-HCl 200 mM + Na 2 SO 4 100mM, pH 7,2

10 D2 [002] protéines AB2, AB4 et AB5 de CvT [004] mutants non toxiques mais avec activité diarrhéique d’AB5 (mutation sur Val-53 ou Ser-97 de A) [007] préparation de mutants AB5 dans solution tampon aqueuse PBS + 0,25% en poids de CHAPS

11 Projet de revendications (1/4) ProduitEtat de la technique solutions stabilisantes d’AB5 avec tampon phosphate, pH 7,4, L-arginine sup ou égale à 10 mM, Pref, L-arginine entre 10 et 50 mM solutions stabilisantes d’AB5 avec PBS + CHAPS sup ou égal à 0,05% en poids, Pref CHAPS sup ou égal à 0,15% en poids D2 [007] : AB5 mutant avec PBS + 0,25% en poids CHAPS, pour administration de la protéine à une souris

12 Projet de revendications (2/4) ProcédéEtat de la technique Méthode pour déterminer la proportion de protéines de type AB5 complexée (fonctionnelle) dans un échantillon : - traitement de l’échantillon par chromatographie sur colonne avec matériel de support = HyPM avec groupes carboxyles libres [Ultrahydrogel-250, taille particulaire 6 µm, porosité 250 nm] et solution tampon Tris-HCl 200 mM + Na 2 SO 4 100mM, pH 6,8 – 7,6 Pref pH 7,2 - Détection AB5 et B5 par spectroscopie d’absorption UV + quantification D1 : méthode comportant les mêmes étapes, appliquée à une protéine différente (deux sous- unités identiques) et pour une finalité différente +/- calcul FS=AB5/(AB5+B5)x100, OK si > 70%, de pref > 80%, très pref > 90%

13 Projet de revendications (3/4) ProcédéEtat de la technique Méthode de criblage de solution stabilisante qui comprend: (1)incubation de la protéine AB5 dans une solution à tester (2)mesure de la stabilité de la protéine AB5 incubation : durée entre heure et mois; à température: basse (4°C) ou ambiante (20-25°C) ; agitation ou non, si agitation, la durée peut être raccourcie optionnellement (3) test in vivo ou in vitro de l’activité biologique AB5 (connu de l’état de la technique)

14 Projet de revendications (4/4) UtilisationEtat de la technique Utilisation comme solution stabilisante d’AB5 un tampon phosphate, pH 7,4, L-arginine sup ou égale à 10 mM, pref entre 10 et 50 mM Utilisation comme solution stabilisante d’AB5 du PBS + CHAPS sup ou égal à 0,05% en poids, pref CHAPS sup ou égal à 0,15% en poids D2 pour AB5 mutée avec PBS + 0,25% en poids de CHAPS

Revendications de produit (20 points) Composition AB5 + tampon phosphate, pH 7,4*, avec au moins 10 mM de L-arginine (10 points) *cf [023] lettre du client Composition AB5 + PBS avec au moins 0,05% en poids de CHAPS à l’exclusion d’une composition qui comprendrait AB5, PBS et 0,25% en poids de CHAPS Ou Composition AB5 naturelle + PBS avec au moins 0,05% en poids de CHAPS (10 points) 15

Revendication de méthode (15 points) Méthode pour déterminer la proportion d’une protéines de type AB5 complexée dans un échantillon comprenant les étapes de : - traitement de l’échantillon par chromatographie sur colonne avec matériel de support comprenant un HyPM avec groupes carboxyles libres ; - élution avec une solution tampon Tris-HCl 200 mM + Na 2 SO 4 100mM, à pH compris entre 6,8 et 7,6 ; - détection de la protéine éluée ; - détection de la quantité de protéine B5 et de protéine AB5 à l’état complexé [et calcul du FS = AB5/(AB5+B5)x100] 16

Revendication de méthode (20 points) Méthode de criblage de solution stabilisante de AB5 à l’état complexé qui comprend : (1) mélange de la protéine AB5 avec une solution à tester ; (2) incubation du mélange obtenu à l’étape (1) ; (3) mesure de la stabilité de la protéine AB5 dans ladite solution à tester par la méthode selon la revendication 1 ; (4) [si absent dans rev. 1, calcul du FS] Un FS > 70% indique que la solution à tester stabilise AB5 à l’état complexé. 17

Revendication d’utilisation (15 points) Utilisation d’une composition comprenant un tampon phosphate et au moins 10 mM de L-arginine pour stabiliser une protéine AB5 (7,5 points) Utilisation d’une composition comprenant du PBS et au moins 0,05% en poids de CHAPS pour stabiliser une protéine AB5 (7,5 points) 18

Revendications dépendantes (15 points) Revendications dépendantes de méthode de mesure de la stabilisation pH = 7,2 Support : taille particulaire 6µ et porosité 250 nm Colonne CLHP Si pas déjà introduit : calcul du FS Revendications dépendantes de méthode de criblage de solution stabilisante Incubation à 4°C Incubation à température ambiante Incubation sans agitation Incubation avec agitation (!) ne pas dépasser 15 revendications 19

Revendications dépendantes (suite) Revendications dépendantes de produit L-arginine entre 10 et 50 mM CHAPS AB5 de EcT ou CvT Revendications dépendantes d’utilisation L-arginine entre 10 et 50 mM CHAPS AB5 de EcT ou CvT (!) ne pas dépasser 15 revendications 20

21 Description (15 points) En général: 15 ‘easy’ points Utiliser le texte de la note technique Insérer dans le texte des paragraphes pour: –Commenter l’EDT communiqué par le client –Poser le problème technique –Définir l’invention et expliquer comment elle résout le problème technique Adapter la description, si nécessaire, pour supprimer ce qui ne relève plus de l’invention.