Antibiogramme par diffusion en milieu gélosé (méthode des disques Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Concentration Minimale Inhibitrice Notion de CMI Concentration Minimale Inhibitrice  plus faible concentration en antibiotique capable d’inhiber in vitro toute croissance visible de la bactérie étudiée. Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Détermination de la CMI Volume rejeté : 0,5 mL Volume reporté (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Antibiotique 400 mg/L (mL) 0,5 Bouillon MH (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Inoculum bactérien (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 C ATB (mg/L) 100 50 25 12.5 6.25 3.125 Incubation Résultats

Principe de l’antibiogramme par diffusion Disque antibiotique(6mm) Charge connue Inoculation par étalement en surface de la gélose CMI CMI Culture Culture Gélose Mueller Hinton (4mm) Zone d’inhibition de la culture Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Gradient de diffusion et zone d’inhibition Zone d’inhibition de la culture Gradient d’antibiotique décroissant Disque d’antibiotique Colonies C1 C2 C3 C4 C1 > C2 > C3 > C4 Diamètre d’inhibition Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND Résultats Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Evolution du gradient dans le temps Temps écoulé depuis le dépôt du disque : 2h 4h 6h 8h 20 Evolution du gradient dans le temps 15 Concentration en antibiotique dans le milieu gélosé (UI/mL) 10 5 3 5 10 15 Distance au centre de la source (mm) Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Facteurs influençant les résultats Facteurs influençant la diffusion de l’antibiotique : Epaisseur de la gélose Concentration en agar Taille et charge du disque Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Facteurs influençant les résultats Facteurs influençant l’activité de l’antibiotique : Concentrations ioniques du milieu (Ca2+, Mg2+) pH du milieu Concentration de l’inoculum bactérien Pré-incubation / Pré-diffusion Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Influence de l’inoculum Diamètre d’inhibition (mm) 26 24 22 20 18 Concentration bactérienne de l’inoculum (UFC/mL) 16 Aspect de la culture après 18h d’incubation 108 107 106 105 104 103 Colonies tangentes Colonies isolées Nappe Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Influence Pré-incubation / Pré-diffusion Diamètre d’inhibition (mm) S.aureus E.coli Avantage à la bactérie 30 25 Avantage à l’antibiotique a et b : temps critiques 20 15 a b Temps (h) 8 6 4 2 2 4 6 8 Pré-incubation : retard au dépôt des disques Pré-diffusion : retard à l’incubation Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND Méthode standardisée Selon le Comité de l’antibiogramme de la Société Française de Microbiologie (http://www.sfm.asso.fr/nouv/general.php?pa=2) Milieu Mueller Hinton Epaisseur 4 mm Inoculum permettant d’obtenir des colonies adjacentes mais non confluentes Pré-diffusion = Pré-incubation Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Construction des abaques 1 Souche X Détermination du diamètre d’inhibition en milieu gélosé Détermination de la CMI en tubes CATB (mg/l) 16 8 4 2 1 0,5 0,25 CMI Diamètre d’inhibition  Relation CMI/  Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Construction des abaques 2 Répétition pour un grand nombre de souches Relation CMI/ Droite de corrélation  / Log2CMI Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Construction des abaques 3  (mm) Droite de corrélation 35 30 25 20 15 10 5 CMI mg/L (échelle log2) 0,25 0,5 1 2 4 8 16 Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Notion de Concentrations critiques Les Concentrations critiques sont : des Concentrations de référence en antibiotique inférieure (c) et supérieure (C) permettant de classer les souches bactériennes dans des catégories cliniques (S, I ou R) en fonction de leur CMI permettant donc d’évaluer la probabilité de succès d’une antibiothérapie Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Notion de Concentrations critiques - les concentrations critiques sont fixées par : le CA-SFM (Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie) l’EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Notion de Concentrations critiques c et C déterminées par des: - Etudes pharmacologiques : concentrations en ATB moyennes minimales (c) et maximales (C) obtenues dans le plasma, et les tissus ; - Etudes bactériologiques : distribution des CMI vis-à-vis des différentes espèces pathogènes ; - Etudes cliniques : confrontation des CMI estimées in vitro et des résultats thérapeutiques Equipe pédagogique du Lycée Jean Moulin ANGERS – Bruno DURAND

Construction des abaques 4  (mm) Concentrations critiques et construction de l’abaque 35 30 D 25 1 25 20 15 d 4 13 10 5 0,25 0,5 1 2 4 8 16 CMI mg/L CATB (mg/L) Diamètre (mm) c C

Lecture / Interprétation : Cas 1 Diamètre (mm) D d 1 c C CATB (mg/L) 1 > D Forte probabilité de succès thérapeutique Souche sensible CMI < c

Succès thérapeutique imprévisible Lecture / Interprétation : Cas 2 Diamètre (mm) D d 2 c C CATB (mg/L) D > 2 > d Souche intermédiaire Succès thérapeutique imprévisible c < CMI < C

Forte probabilité d’échec thérapeutique Lecture / Interprétation : Cas 3 Diamètre (mm) D d 3 c C CATB (mg/L) D > 3 Forte probabilité d’échec thérapeutique Souche résistante C < CMI

Lecture / Interprétation : Synthèse Diamètre (mm) D d S I R c C CATB (mg/L) Zone de sensibilité Zone intermédiaire Zone de résistance