Généralités Techniques immunologiques Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Spécificité de la liaison Ac-Ag Utilisée pour : Rechercher et/ou doser des anticorps présents dans le sang : c’est la sérologie. Rechercher et/ou doser des antigènes. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Qu’est ce qu’un anticorps (Ac) ? Une glycoprotéine présente dans le plasma (ou le sérum), la lymphe ou autres liquides biologiques ; synthétisée par des plasmocytes en réponse à la rencontre avec un antigène ; reconnaissant spécifiquement un antigène. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Structure d’un Ac Paratopes Chaînes légères Régions variables Ponts disulfures Région constante Chaînes lourdes Site d’activation du Complément Site de fixation aux phagocytes Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Qu’est ce qu’un antigène (Ag) ? Une molécule : capable de stimuler le système immunitaire ; reconnue de façon spécifique par les effecteurs de ce système parmi lesquels se trouvent les Anticorps (Ac). Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Nature des Antigènes majoritairement de nature protéique ; parfois glucidiques ou lipidiques. Ag Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Notion d’épitope Ag Epitopes Région limitée de l’Ag reconnue spécifiquement par les paratopes d’un Ac Ag Epitopes Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Notion de valence Nombre de sites de liaison d’un Ac ou d’un Ag Ag à 1 épitope Valence = 1 Ig G : 2 paratopes Valence = 2 Ig M : 10 paratopes Valence = 10 Ag à 2 épitopes Valence = 2 Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Définition du complexe immun Édifice moléculaire formé par l’association d’Ag et d’Ac spécifiques créant des réseaux de grande taille si Ac et Ag sont multivalents et dans les conditions de l’équivalence Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Différents types de réactions sérologiques Antigènes Anticorps Révélation Réseau d’IC formant des agglutinats Agglutination particulaires agglutinants Réseau d’IC formant des précipités Précipitation solubles précipitants biologiquement actifs Absence d’activité biologique Neutralisation neutralisants Fixation du complément IC fixant le complément sur le Fc de l’anticorps Absence de lyse cellulaire conjugués par couplage avec un marqueur : fluorochrome, enzyme ou radioisotope Recherche du marqueur ou de ses effets Immunomarquage Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Les étapes des techniques qualitatives Sérum (Ac) Ag Les étapes des techniques qualitatives Incubation Formation de complexes immuns Lecture directe ou indirecte Témoins, Contrôles qualité Test Le plus souvent réalisées sur lame ou sur carte Interprétation Présence significative d’Ac ou non Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Les étapes des techniques quantitatives Dilution en série du sérum Ag Les étapes des techniques quantitatives Incubation Formation de complexes immuns Le plus souvent réalisées en tubes ou en microplaques Lecture directe ou indirecte Témoins, Contrôles qualités Tests Interprétation Titre du sérum en Ac Conclusion par rapport au seuil Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Principe des dilutions en série Volume rejeté (mL) : 0,5 Volume reporté (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Volume de diluant (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Volume de sérum (mL) ou de produit 0,5 0,5 Quantité arbitraire d’Ac ou d’Ag par tube Dilution 1 1/2 1/4 1/8 … Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Volume rejeté (mL) : 0,5 Tube 1 2 3 4 5 6 7 Diluant (mL) Sérum pur (mL) Volume reporté (mL) Dilution initiale Ag (mL) Dilution finale 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Témoins et contrôles Témoins « réactifs » validant les réactifs Témoin « produit » validant la spécificité de la réaction Témoins de lecture donnant une référence Contrôles de qualité validant l’ensemble de la technique Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Témoins et contrôles Témoins « réactifs » testant l’absence de réaction des réactifs sans le produit à tester appelés témoins de série (à tester une seule fois lors d’une étude en série de plusieurs produits différents) . Exemple : Témoin Ag dans une réaction d’agglutination active Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Témoins et contrôles Témoin « produit »  testant l’absence de réaction parasite (non liée à la réaction étudiée). appelés témoins de réaction (à réaliser pour chaque produit) Exemple : Témoin sérum dans les réactions d’agglutination passive. Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Témoins et contrôles Témoins de lecture mettant en jeu certains réactifs ou produits participant ou non à la réaction servant de référence de lecture Témoin 100 % d’hémolyse Témoin 50 % d’hémolyse Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Témoins et contrôles Contrôles de qualité  utilisant des produits (sérums de contrôle, antigènes) titrés et connus appelés aussi témoins positif et négatif (technique qualitative). permettant de valider l’ensemble de la technique Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Titre Dilution limite (la plus forte) du produit qui donne encore une réaction visible exprimée en Rapport de dilution Facteur de dilution En UI par volume de produit pur à l’aide d’une référence titrée Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND

Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) Seuils De sensibilité d’une réaction Plus faible concentration de produit détectable par la technique (valeur donnée par le fabricant) D’interprétation Valeur à partir de laquelle la concentration trouvée est significative Année 2008 Équipe pédagogique du lycée Jean MOULIN (ANGERS) POCHET - DURAND