Une nouvelle méthode pour la détection du GHB ? Jennifer Comte - Alain Waser École des sciences criminelles Université de Lausanne

Plan Description du GHB Les méthodes actuelles pour son dosage Une nouvelle méthode Résultats et comparaison 19.01.2005

Gamma-hydroxy-butyrate (GHB) Crée en 1961 par le Pr. Laborite Pour ses propriétés anesthésiques Psychostimulant, substitut aux amphétamines et à l’ecstasy Dans la liste des stupéfiants depuis 2002 (appendice a, OStup-Swissmedic, RS 812.121.2) 19.01.2005

Effets du GHB Amnésie des faits, impression de consentement Effet 15-30 min après absorption; durée de 1h à 24h (selon dosage) Dose létale 1700 mg / kg 19.01.2005

Le GHB, LA drogue du violeur Rapide, inodore, incolore, actif à faible dose Présent sous la forme de liquide, poudre, capsules ou en granulés Soluble en milieu aqueux ( incorporable dans une boisson) Désinhibition de la victime 19.01.2005

Les précurseurs du GHB Rapidement converti en GHB in vivo 19.01.2005

Utilisation des méthodes analytiques dans l’analyse du GHB Vise à répondre à certaines questions: Ingestion de GHB ? Dose absorbée ? Il y a combien de temps ? 19.01.2005

Contexte forensique Analyse difficile Rapidement métabolisé Demi-vie : 20 à 30 minutes (en fonction de la dose) Détection possible dans la salive jusqu’à 4h après l’ingestion, dans le sang jusqu’à 8h, dans l’urine jusqu’à 12h Composé endogène (intra et inter variabilité non négligeable, facteurs biochimiques) Préservation de l’échantillon (production in vitro de GHB) Faible PM, haute polarité, instabilité thermique Transformation in vitro influencée par temps, température et pH 19.01.2005

Méthodes actuelles Principalement GC Head-space – GC – FID Dérivatisation nécessaire avant analyse Cyclisation du GHB en GBL (avec H2SO4 conc.) Head-space – GC – FID Echantillons positifs passent au GC – MS Perte de temps + faible analyse quantitative 19.01.2005

Méthodes actuelles Électrophorèse capillaire Chromatographie liquide Préparation simple (dilution) Limite de détection élevée (24 mg/L urine) Ne permet pas une analyse simultanée des précurseurs et du GHB Chromatographie liquide LC – UV LC – MS Mais, sensibilité limitée… 19.01.2005

Méthodes actuelles Urine Sang Limites de quantification (en mg/L) Inférieur à 10 Inférieur à 5 Prise d’essai pour analyse (en µL) 20 à 50 Limite de détection (en µg/mL) 0,5 à 2 Méthodes d’analyse GC/MS ; GC/FID ; CZE 19.01.2005

Méthode proposées LC – MS / MS Instrumentation Chromatographe Waters® Alliance 2795 19.01.2005

Méthode proposée Conditions d’analyse Colonne dC18 Atlantis® (3mm x 100mm, 5μm), phase inversée C18 sur silice. Rétention des composés polaires dans les phases mobiles aqueuses Maintenue à 35°C Élution isocratique (acide formique 0,1% : méthanol, 90 : 10) Débit 0,2 mL / min Injection de 10 μL Temps entre chaque injection 12 min 19.01.2005

Méthode proposée Spectromètre de masse Spectromètre de masse Tetra micro tandem (Waters) Ionisation positive Potentiel 3,5 kV, bloc à 120°C Gaz porteur : Azote à 350°C et 12 L / min 19.01.2005

Méthode proposée 19.01.2005

Méthode proposée http://wwwsoc.nii.ac.jp/jsac/indexeng.html 19.01.2005

Méthode proposée Résultats avec des échantillons dilués d’urine Les 3 composés sont différenciés grâce à cette méthode (tr GHB 4,5 min ; tr GBL 5,4 min) Obtenus par intégration de l’air sous chaque pic du chromatogramme effectué en mode MRM (Multiple Reaction Monitoring) 19.01.2005

Méthode proposée Reproductivité sur une période de 24 heures Rond 50 mg/L produit ajouté dans l’urine Carré 10 mg/L produit ajouté dans l’urine A) GHB B) GBL 19.01.2005

Résultats et comparaisons Avantage de la méthode LC – MS/MS : Plus rapide que GC – MS (12 min au lieu de 1h) Nécessite une seule opération pour quantifier simultanément le GHB et ses précurseurs Sensibilité élevée 1 mg/L (permet de différencier GHB endogène et exogène) Préparation simple (analyse d’un grand nombre d’échantillons en routine) 19.01.2005

Références M. Wood et al., Simultaneous analysis of gamma-hydroxybutyric acid and its precursors in urine using liquid chromatography–tandem mass spectrometry, Journal of Chromatography A, 1056 (2004) : 83–90 K. Aebersold, GHB, Synthèse et transformation, Séminaire IPS, 2004 http://psydoc-fr.broca.inserm.fr/toxicomanies/toxicomanie/produits/synthedrogs/ghb/ghb.htm 19.01.2005

attention à votre verre… Et surtout… Merci pour votre attention N’oubliez pas de faire attention à votre verre… 19.01.2005