DPI pour maladies dominantes avec mutation de novo (ou sans apparenté atteint disponible) : la prise en charge est possible. Assises de Génétique Humaine et Médicale Lyon, 4 février Emmanuelle KIEFFER, PhD Laboratoire de Diagnostic Préimplantatoire Strasbourg

L’expérience Strasbourgeoise (2006 – 2015) :  55 demandes  42 tests développés (+ 6 en cours)  dont 30 depuis 2012

DPI pour formes familiales DPI Détermination de l’haplotype associé à l’allèle muté en amont du DPI. Diagnostic indirect possible. Haplotypes / Marqueurs microsats Mutation Légende / représentation schématique :

DPI pour néomutations Recherche de la mutation obligatoire  mise au point pour chaque couple. « Haplotypage »: Détermination de l’haplotype associé à la mutation, avant ( ♂ ) ou lors ( ♀ ) du DPI. ? ?

Haplotypage  Néomutation ♂ :  Sperm typing (>20 spz).  Avec le test multiplex validé sur cellules uniques.  Néomutation ♀ :  Au moment du DPI, directement sur les embryons.  Intérêt des ADN parentaux pour anticiper phase des marqueurs entre eux. DPI

Difficultés (1)  Visualisation de la mutation :  Allele Drop Out - ADO (~5-10%) – absence d’amplification d’un des deux allèles  Contamination (rare)  Nécessité d’analyser suffisamment de spz / d’embryons !!!  DPI : analyse de 2 cellules / embryon systématiquement. DPI "ADO" ADO c1 c2 c1 c2 c1 c2 DPI Conta. c1 c2 c1 c2 c1 c2 Conta.

Difficultés (2) : mosaïques  Lymphoblastes isolés : « ADO » / mutation +++  Mosaïque ?  Spermatozoïdes isolés : deux populations avec le même haplotype (marqueurs), +/- mutation  Mosaïque germinale ?  Par précaution (risque d’ADO) : rejet des embryons porteurs de l’haplotype qui est associé à la mutation. DPI c1 c2 c1 c2 c1 c2 Non transférablesTransférable x15x8x7 X 40 X 20

Exemple DPI Distance / APC D5S kb D5S kb Exon 15 (sizing) D5S kb D5S kb D5S kb 164 / / / / / / / / (del) / 252 (N) 110 / / / 165 APC c delACCCT ; Thr1301fs1312X exon 15 De novo 164 / / / / / / 163 Mutation absente 170 / / / / / / / / 235 ( 247 (del) / 252 (N) ) 110 / / / / / / / / / 161  Développement multiplex (5 marqueurs + exon 15)  Sperm typing D5S2027 D5S1965 Exon 15 (sizing) D5S346 D5S2001 D5S421 D5S2027 D5S1965 Exon 15 (sizing) D5S346 D5S2001 D5S / / / (1c) / / / (2c) 164 / / / / / 150 (2c) 164 / / (del) / 252 (N) 110 / / / / / / (1c) / / / (2c) Mutation absente

Résultats Nb Biopsies / DPI 39 (23 couples dont 13 avec mut. maternelle ) Embryons avec résultat (embryons analysés) 233 (98% emb analysés) (237 ; moy. 6,1 / DPI) Nb E transférables - atteints Nb Transferts (Nb E) 33 (36) Nb Congélations d‘E sains surnuméraires (Nb E) 10 (19) Nb Transfert d’E sain surnuméraire congelé (Nb E) 2 (2) Nb de grossesses cliniques (couples) 11 (10) Nb accouchements (Nb bébés) * 5 (5) + 2 g. en cours *4 Grossesses arrêtées : 3 FCS <12 SA (dont 1 sur g. gém.) + 1 IMG <22SA pour T21.

Conclusion  DPI pour mutations de novo :  Possible !  Mise au point systématique + particularités.  Nécessité de bons paramètres pour la FIV.  Biopsie 2 cellules systématiquement.  Attention aux mosaïques !  Information des couples !  Forme familiale mais pas d’ADN d’apparenté atteint : même démarche, sans risque de mosaïque.

Equipe du Laboratoire de DPI à Strasbourg Responsable : Dr Céline MOUTOU Génétique Moléculaire Dr Céline Moutou Nadia Bihemi Dr Emmanuelle Kieffer Nathalie Gardes Jean-Christophe Nicod Equipe d’AMP bio Dr Isabelle Lichtblau Biopsie Dr Catherine Celebi Dr Isabelle Koscinski Nicolas Becker Nathalie Ruch Conseil Génétique Claire Kastner Secrétariat DPI Laetitia Mosser Elodie Schaaf Cytogénétique Dr Philippe Gosset Sarah Casalanguida Caroline Retter Estelle Berthe Equipe clinique AMP-DPI Dr Olivier Pirrello Dr Catherine Rongières - Marie-Paule Bailly Carole Bilger Sages-femmes & secrétaires