SOUTENANCE HABILITATION UNIVERSITAIRE Université Abderrahmane Mira de Bejaia Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie Laboratoire de Biomathématiques Biophysique Biochimie et Scientométrie SOUTENANCE HABILITATION UNIVERSITAIRE Spécialité : Biologie Présentée par: AMESSIS-OUCHEMOUKH Nadia Devant le jury composé de : Président Mr MADANI Khodir Professeur U. Bejaia Examinateur Mr KEBIECHE Mohamed U. Jijel Mr ARRAR Lekhmici U. Sétif Examinatrice Mme KHETTAL Bachra Maître de conférences A Mr ZAIDI Farid Rapporteur Mme BOULEKBACHE Lila Mme AMELLAL Hayat U. Boumerdès Mme HAMRI Sabrina

Plan Diplômes et carrière universitaire Activités pédagogiques Elaboration d’un polycopié de cours Activités de recherche Productions scientifiques

I.1. Diplômes Universitaires Option: Science de la Nature et de la Vie Lieu: Lycée Mouhali Aamar, Seddouk Baccalauréat 1999 Ingénieur d’Etat Option: Contrôle de qualité et Analyses Lieu: Université A. MIRA de Bejaia 2004 Magister Option: Sciences Alimentaires Lieu: Université A. MIRA de Bejaia 2007 Docteur en Sciences Option: Sciences Alimentaires Lieu: Université A. MIRA de Bejaia 2015

I.2. Carrière Universitaire 2015 Maître de conférences classe B (MCB) Université Abderrahmane Mira de Bejaia. 2011 Maître assistant classe A (MAA) Université Abderrahmane Mira de Bejaia. 2008 Maître assistant chargé de cours (MAB) Université Abderrahmane Mira de Bejaia. Maître assistant stagiaire Université Abderrahmane Mira de Bejaia. 2007

I.3. Stages et formations 2003-2006 ► Stages CK Fleisch, sis Tahracht, Akbou ▪Analyses microbiologiques et physicochimiques des produits carnés. CO.G.B. Spa, sis à Bejaia  ▪Raffinerie d’huile, margarinerie, savonnerie et traitement des eaux. LABO-IDRES sis à Bejaia ▪ Laboratoire d’analyse et de contrôle de la qualité des produits alimentaires, cosmétiques et hygiène corporelle. ► Formations ▪ Spectrophotométrie UV/VIS SHIMADZU 1240 (SOAL CHIM) au niveau du laboratoire 3BS, université A.MIRA de Bejaia. ▪ Formation bureautique, Bejaia.

2010 Stage à la Faculté des Sciences Université de Lisbonne, Portugal. ▪ Période: Mois de Mai et Décembre ▪ Détermination des activités antioxydantes, anti-inflammatoires et anti-acétylcholinestérase de dix plantes médicinales.

Université de Grenade, Espagne. 2011-2012 Stage au Centre CIDAF de la Faculté des Sciences Université de Grenade, Espagne. ▪ Caractérisation phytochimique par UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS de quelques extraits de plantes médicinales.

Université de Marseille, France. 2013-2016 Stage à l’INSERM UMR de la Faculté de Pharmacie, Université de Marseille, France. ▪ Détermination des activités anticancéreuse, antioxydante et anti-calpaïnes des extraits et fractions de quelques plantes médicinales, échantillons de pollen, fruits secs et miels algériens.

II. Activités Pédagogiques Modules assurés Niveaux Années universitaires Conditionnement et Emballage (Cours et TD) 5ème année Ingénieur en Sciences Alimentaires 2007-2008 Génétique Fondamentale 1ère année Master en Biotechnologie 2007-2015 Industrie des Produits Laitiers et Dérivés (Cours , TD et TP ) 3ème année Licence Industries Laitières et Corps gras 2008-2013 Technologie des Corps Gras 2008-2012 Maladies Métaboliques (Cours) 1ère année Master en : ISAM Alimentation Nutrition Bioprocédés et Technologies Alimentaires Industrie Laitière et Corps Gras Qualité des Produits et Sécurité Alimentaire 2010- à ce jour

Technologies des Industries Agro-alimentaires Modules assurés Niveaux Années universitaires Technologies des Industries Agro-alimentaires (Cours et TP ) 3ème année Licence Alimentation et Nutrition 2013-2016 Préparation à l’Employabilité (Cours et TD) Emballage et qualité Alimentation Nutrition et Pathologies 2014- à ce jour Nutrition et Pathologies (Cours ) 2015- à ce jour Production des Corps Gras Master 1 Sciences des Corps Gras 2016- à ce jour

Analyses Sensorielles Travaux Dirigés assurés Niveaux Années universitaires Biochimie Générale 2ème Année LMD (Troncs communs) 2007-2009 Conservation et Conditionnement des Aliments Master 1 SA : Bioprocédés et Technologie Alimentaire Industrie Laitière et Industrie des Corps Gras 2016- à ce jour Travaux Pratiques assurés Niveaux Années universitaires Analyses Sensorielles 5ème année Ingénieur en Contrôle de Qualité et Analyses 3ème année DEUA CQAA 1ère année Master : - Industrie Laitière - Corps gras 2ème année Master : - Biotechnologie - Sciences Alimentaires 2007-2012 Biochimie Générale 2ème Année LMD (Troncs communs) 2007-2009 Physiologie des Microorganismes 1ère année Master Biotechnologie 2011-2012 Analyses Microbiologiques 1ère année Master Industries Laitières 2012 Composition et Analyses des Aliments 3ème année Licence : - ISAM - ILCG 2013

III. Elaboration d’un Polycopié de cours Allergies et intolérances alimentaires 1. Allergies alimentaires 2. Intolérances alimentaires 3. Diagnostics des allergies et des intolérances alimentaires 4. Traitements des allergies et des intolérances alimentaires Le polycopié de cours s’adresse à priori aux étudiants de niveau Master spécialisés dans les disciplines des Sciences Alimentaires

Encadrements 12 PFE Ingénieur d’Etat en Contrôle de Qualité et Analyses DEUA Ingénieur d’Etat en Contrôle de Qualité et Analyses des aliments Master Corps Gras Sciences des Aliments Master Bioprocédés et Technologies alimentaires 1 3 6

Sorties pédagogiques 2011: Sortie pédagogique avec les étudiants 3ème année Spécialité: Licence Industrie Laitière et Corps Gras. Organisme d’accueil: Corps Gras de Bejaia la Belle (COGB), Spa. 2012: Sortie pédagogique avec les étudiants 3ème année Spécialité : Licence Industrie Laitière et Corps Gras. Organisme d’accueil: Le groupe DANONE Djurdjura Algérie, Spa.

IV. Activités de recherche 4.1. Travaux de thèse 4.2. Travaux hors thèse

4.1. Travaux de thèse THЀSE DE DOCTORAT  Caractérisation phytochimique par UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS de quelques extraits de plantes médicinales et la détermination de leurs propriétés biologiques : anti-inflammatoire, anti-acétylcholinestérase et antioxydante 

Objectifs Valorisation des ressources végétales La recherche de nouvelles molécules d’origine végétale à propriétés biologiques : antioxydante, anti-inflammatoire et anti-acétylcholinestérase

Matériel et méthodes

Plantes médicinales Marrubium vulgare Scilla maritima Pistacia lentiscus Eryngium maritimum Myrtus communis Globularia alypum

Récolte des échantillons de plantes Pistacia lentiscus (feuilles) Myrtus communis (feuilles et baies) Scilla maritima (bulbes) Marrubium vulgare (feuilles) Eryngium maritimum (feuilles et tiges) Globularia alypum (feuilles et fleurs)

Traitement des échantillons de plantes Identification Lavage Séchage Humidité (AOAC, 2000) Broyage, tamisage Poudres (Aw) Extraction

1. Dosage des antioxydants Polyphénols totaux Flavonoïdes totaux Flavonols Tannins Proanthocyanidines Caroténoïdes

2. Détermination de l’activité antioxydante Neufs méthodes sont utilisées pour évaluer les capacités antioxydantes des extraits de plantes Pouvoir scavenger du: DPPH˙, O2˙, OH˙ ●Inhibition du blanchissement de l’émulsion β-carotène-acide linoléique ●Pouvoir chélateur de fer ●Test au phosphomolybdate L’inhibition de la production des ROS en utilisant la chimiluminescence à la lucigénine sur des cellules gliales tumorales U87 Non radicalaire : H2O2 Dérivée d’azote : NO˙

3. Détermination des activités anti-inflammatoire et anti-acétylcholinestérase

Cyclooxygénase-1 Péroxydase 1. Pouvoir inhibiteur de la cyclooxygénase-1 2. Inhibition de la xanthine oxydase Acide arachidonique Cyclooxygénase-1 Bis-endohydropéroxyde (PGG2) Péroxydase Molécule ayant un maximum d’absorption à 290 nm Prostaglandine H2 (PGG2)

3. Inhibition de l’acétylcholinestérase " Test d’Ellman" Acétylthiocholine Thiocholine Acétate Dithiobisnitrobenzoate (DTNB) 2-nitrobenzoate-5-mercaptothiocholine 5-thio-2-nitrobenzoate (Jaune)

4. Caractérisation des extraits de plantes par UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS RP-UHPLC Spectromètre de masse microTOF-Q II Couplée Globularia alypum Marrubium vulgare Pistacia lentiscus

Résultats et discussion

Partie de la plante Composition biochimique Solubilité Conditions climatiques Activité de l’eau, Humidité et Rendement d’extraction Humidité varie de 50,5 à 76,1%. Paramètres Plantes Activités de l’eau Humidités (%) Rendements d’extraction mg/g ES P. lentiscus feuilles 0,328e 52,87e 15,14e M. communis feuilles 0,309g 51,17f 14,81d M. communis baies 0,371b 57,45d 29,84a M. vulgare feuilles 0,348c 76,1a 6,67f G. alypum feuilles 0,330d 50,54g 28,53b G. alypum fleurs 0,263i 50,5g 14,29e E. maritimum feuilles 0,324f 57,19d 5,26g E. maritimum tiges 0,454a 70,19c 3,79i S. maritima bulbes 0,304h 73,74b 3,96h Poudres à faibles aw Aw Feuilles<aw baies et tiges Les baies de M. communis et feuilles de G. alypum Rendements très élevés

Teneurs en antioxydants Polyphénols Flavonoïdes Flavonols Tannins Proanthocyanidines Caroténoïdes P. lentiscus feuilles 238,326±3,276 19,578±0,326 7,292±0,242 100,694±2,409 39,287±0,613 8,429±0,124 M. communis feuilles 285,731±2,278 24,868±0,415 7,380±0,038 117,670±1,543 19,102±0,116 8,808±0,019 M. communis fruits 91,338±3,923 7,170±0,083 4,239±0,143 28,807±0,803 22,132±0,336 2,976±0,019 M. vulgare feuilles 40,571±1,907 10,249±0,083 10,484±0,190 32,407±0,386 12,285±0,134 8,783±0,043 G. alypum feuilles 102,295±0,497 16,592±0,799 3,259±0,132 9,388±2,357 14,179±0,139 8,119±0,099 G. alypum fleurs 156,968±1,143 1,346±0,023 3,121±0,408 7,459±0,223 14,067±0,830 6,435±0,039 E. maritimum feuilles 43,825±1,315 24,309±0,262 7,632±0,218 33,179±1,391 11,973±0,139 8,665±0,028 E. maritimum tiges 16,489±0,188 3,505±0,061 1,035±0,022 5,594±0,273 10,124±0,102 0,243±0,075 S. maritima bulbes 127,896±1,491 2,159±0,069 2,078±0,058 11,703±0,589 27,412±0,235 ND ± ND

Activité antioxydante Oxydation de la β-carotène M. communis feuilles 63,60% Chélation de fer E. maritimum tiges : 49,78% Capacité de réduction du phosphomolybdate DPPH, O2˙ P. lentiscus et M. communis OH˙ E.Maritimum feuilles 54,67 H2O2 M. vulgare 75,35% NO ˙ Bulbes de S. maritima 32,06%

Activité de l’acétylcholinestérase-1 Activités anti-inflammatoire et anti-acétylcholinestérase 61,05 % 68,15 % 96,54 % 92,38 % 73,84 % 65,34 % Activité de Cox-1 Activité de XO Activité de l’acétylcholinestérase-1

UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS Nouveaux composés Composés identifiés G. alypum M. vulgare

Conclusion et perspectives Chaque plante est un réservoir potentiel de substances bioactives (flavonoïdes, acides hydroxycinnamiques, iridoïdes et terpénoïdes) ce qui témoigne et justifie les propriétés antioxydante, anti-inflammatoire et anti-acétylcholinestérase démontrées. En guise de perspectives: Il serait intéressant de compléter la caractérisation des extraits de plantes étudiées et de tester les composés identifiés après isolement avec des essaies in vitro et in vivo. Et enfin, de comprendre surtout leurs modes d’action.

Publications

4.2. Travaux hors thèse

Thème 1 : Composition biochimique et activités antioxydante, anticancéreuse et anticalpaïne de quelques fruits secs. Ficus carica Quercus ilex Ceratonia siliqua

Activités antioxydantes Activité anticalpaïne Antioxydants Caroténoïdes RRLC Couleur Activités antioxydantes ROS Lucigénine Activité anticalpaïne t-Boc MTT Paramètres étudiés

Antioxydants Résultats et discussion Total phenolics (mg CE/100 g DW) Flavonoids (mg QE/100 g DW) Flavonols Proanthocyanidins Ortho-diphenols (mg GAE/100 g DW) Ascorbic acid (mg AAE/100 g DW) Ficus carica 2190.10±17.55c 858.43±10.76c 19.57±0.55b 496.63±3.61a 1189.56±19.00c 14.21±0.07c   Ceratonia siliqua 5165.49±38.32b 1342.51±28.46b 38.23±0.64a 140.00±5.47c 5272.70±24.25b 36.29±0.49a Quercus ilex 37908.80±34.97a 3863.310±25.60a 20.308±0.32b 254.53±2.78b 7734.87±25.03a 35.56±0.26b Ficus carica est très riche en proanthocyanidines. Ceratonia siliqua renferme des teneurs élevées en flavonols et acide ascorbique. Quercus ilex se caractérise par les taux les plus élevés en polyphénols totaux, flavonoïdes et ortho-diphénols.

Caroténoïdes 3 12 β-carotène est identifiée dans les 3 échantillons Matrix Retention time (min) Identified Carotenoids Mean ± S.D. (µg/100 g DW) Ficus carica 3.01 β-Cryptoxanthin 2.14±0.03 7.19 β-Carotene 4.32±0.14 8.24 α-Carotene derivative - Ceratonia siliqua 1.00 Pheophytin a derivative 1 2.35 Chlorophyll b 4.53±2.18 4 Chlorophyll a 4.4 Pheophytin b2 derivative 1 4.68 Pheophytin b2 derivative 2 4.91 Pheophytin b1 derivative 1 4.97 Pheophytin b1 5.25 Pheophytin b2 6.40 Pheophytin a derivative 2 6.61 Pheophytin a 7.33 2.08±0.08 7.99 Quercus ilex 6.10 β-Cryptoxanthin derivative 7.21 3.53±0.00 8.36 α-Carotene 2.87±0.40 3 12 Gousses de la caroube sont trés riches en caroténoïdes et la phéophytine et ses dérivés sont dominants

La couleur Différences significatives entre les échantillons pour les paramètres de la couleur CIELAB Samples L* a* b* C*ab hab Ceratonia siliqua 71.85±0.03a 5.47±0.02c 18.38±0.04b 19.17±0.05b 73.44±0.02a Ficus carica 42.34±0.42c 8.29±0.24a 11.81±0.44c 14.43±0.26c 54.92±1.68b Quercus ilex 66.01±0.06b 6.42±0.01b 21.79±0.04a 22.71±0.04a 73.57±0.03a Tous les échantillons sont situé dans le premier quadrant (valeurs positives de a et b). Les point de Ficus sont plus dispersés: composition en pigments est très variable.

Activités antioxydantes ABTS DPPH Quercus ilex Ceratonia siliqua O2 Quercus ilex NO OH

Tous les échantillons ont présenté un pouvoir réducteur FRAP Mo PR Ferrozine H2O2

XO [250 µg/ml] Quercus ilex a inhibé à 89% la XO par rapport à l’allopurinol 80%. Tous les échantillons ont inhibé la chimiluminescence de la lucigénine et par conséquent, l’inhibition de la production des ROS. ROS

Quercus ilex a montré la meilleure activité cytotoxique. Calpaïnes Après 2h d’incubation, les échantillons ont présenté plus de 50 % d’inhibition de l’activité des calpaïnes. MTT Quercus et Ceratonia réduisent la viabilité cellulaire d’une manière dose dépendante. Quercus ilex a montré la meilleure activité cytotoxique.

Conclusion Ficus carica Ceratonia siliqua Quercus ilex ● Très riches en proanthocyanidines. ● Fort pouvoir réducteur de Mo, H2O2 et chélation de fer. ● Activité anticalpaïne trés élevée . ●Riche en flavonols, acide ascorbique et caroténoïdes. ●Fort pouvoir scavenger du DPPH, ABTS et ROS. ● Activité anticalpaïne trés élevée.. ● Très riche en polyphénols totaux, flavonoïdes et ortho-diphénols. ● Fort pouvoir scavenger du DPPH, ABTS, OH et ROS. ● Pouvoir réducteur trés élevé: FRAP, PR, H2O2 . ●Inhibition de la XO, chélation de fer et activité cytotoxique considérable.. Ficus carica Ceratonia siliqua Quercus ilex

Perspectives Il est intéressant d’approfondir les recherches sur les activités biologiques démontrées.

Triticum vulgare blé dur Triticum aestivum blé tendre Thème 2 : Valorisation des graines de blé dur et de blé tendre à travers l’étude de leurs composition biochimique et la détermination de leurs propriétés biologiques Triticum vulgare blé dur Triticum aestivum blé tendre

Composition biochimique Activités biologiques Paramètres étudiés Composition biochimique Activités biologiques Antioxydants Caroténoïdes RRLC Couleur Activités antioxydantes ROS Lucigénine Activité anticalpaïne t-Boc MTT

Antioxydants Couleur T. vulgare T. aestivum Résultats et discussion Total phenolics (mgCE/100gDW) Flavonoids (mg QE/100gDW) Flavonols (mgQE/100gDW) Proanthocyanidins (mg CE/100gDW) Ortho-diphenols (mgGAE/100gDW) Ascorbic acid (mgAAE/100gDW) Triticum aestivum 4426.6±17.6b 987.5±37.3a 71.7±0.6a 143.3±1.4a 2108.6±29.8a 30.0±0.1b Triticum vulgare 4688.6±28.6a 517.8±27.1b 63.0±0.3b 126.8±0.6b 962.6±10.0b 36.3±0.5a Couleur Samples L* a* b* C*ab hab Triticum aestivum 81.95±0.05a 2.91±0.02b 11.25±0.02b 11.62±0.01b 75.48±0.08b Triticum vulgare 80.73±0.02b 3.31±0.03a 15.93±0.05a 16.27±0.05a 78.25±0.08a Des différences sont constatées entre les paramètres de la couleur CIELAB La distribution des paramètres CIELAB montre que les points des deux échantillons sont superposés ce qui indique que leur composition en pigments est probablement similaire.

Identified Carotenoids Caroténoïdes Matrix Retention time (min) Identified Carotenoids Mean ±S.D. (µg/100g DW) Triticum aestivum 0.95 Antheraxanthin 2.56±0.10 Lutein 2.45±0.15 6.66 Lutein epoxide 1 derivative nd 6.815 α-Carotene 6.94 β-Carotene derivative 7.25 β-Carotene 4.67±1.22 8.37 α-Carotene derivative Triticum vulgare 9.11±0.40 9.46±0.50 3.05 β-Cryptoxanthin 2.98±0.17 5.94 Lutein derivative Zeinoxanthin derivative 6.38 α-Carotene derivative 1 6.70 α-Carotene derivative 2 6.83 28.62±2.92 7.37 9.33±0.87 8.10 α-Carotene derivative 3 8.32 Mise à part la lutéine époxide, tous les composés sont retrouvés dans les deux espèces Triticum. 7 11

Activités antioxydantes H2O2 (%) DPPH (%) OH˙ NO˙ MCA ABTS (%) RP (Abs 700 nm) FRAP (mg CE/100g) PA (mg GAE/100g) Triticum aestivum 66.54±0.8 66.84±0.0 80.56±0.8 48.44±0.2 48.34±0.1 41.18±0.1 1.06±0.0 82.14±0.0 159.45±0.1 Triticum vulgare 58.92±0.6 40.33±0.1 79.81±0.2 63.93±0.2 79.09±0.2 40.18±0.1 0.67±0.0 63.81±1.4 140.02±0.4 Quercetin 99.06±1.5 76.52±0.2 24.69±1.3 50.81±0.1 - Catechin 93.73±0.0 56.09±0.2 34.92±0.1 60.09±0.1 BHA 93.71±0.3 26.63±0.5 67.64±0.5 53.22±0.7 Trolox 77.01±0.7 EDTA 98.78±0.0 T. aestivum scavenge efficacement le DPPH et présente un très fort pouvoir réducteur (FRAP, Mo, PR, H2O2 ). T. vulgare chélate le fer et réduit le NO.

ROS T. aestivum, fort pouvoir scavenger des ROS après 15min d’incubation. T. vulgare est presque inactive soit en variant la concentration ou la durée d’incubation. Les espèces Triticum inhibent la XO d’une manière dose dépendante. T. aestivum testé à 500 µg/ml est plus efficace que l’allopurinol. XO

T. vulgare à 1000 µg/ml réduit la viabilité cellulaire à 80%. MTT T. vulgare à 1000 µg/ml réduit la viabilité cellulaire à 80%. Alors qu’avec les calpaïnes, les deux espèces ont présenté les mêmes capacités d’inhibition après 4h et 6h de traitement. t-Boc

Conclusion Perspectives Valoriser ces deux espèces de blé algérien en boostant le travail sur les différentes propriétés biologiques démontrées. T. vulgare est une espèce de blé très intéressante vue sa composition riche en polyphénols et caroténoïdes; mais aussi sa capacité chélatrice de fer et sa propriété cytotoxique. T. aestivum est une source très importante en flavonoïdes et proanthocyanidines, et possède des capacités antioxydantes très importantes mais aussi inhibe fortement la XO et les calpaïnes.

Thème 3 : Détermination de quelques propriétés biologiques du pollen 8 échantillons de pollens

Paramètres étudiés Propriétés physicochimiques Analyse pollinique Composés bioactifs Activités antioxydantes Activité anticancéreuse Humidité Activité d’eau Brix Taux de cendres Couleur Protéines Détermination de l’origine botanique du pollen Composés phénoliques totaux Flavonoïdes Flavonols Proanthocyanidines Caroténoïdes Pouvoir scavenger des radicaux : Test MTT Test d’adhésion Cellules gliales tumorales U87 DPPH ABTS OH Pouvoir réducteur A u ferricyanure de potassium Phosphomolybdate FRAP

Résultats et discussion Tests Echantillons Humidité (%) aw Cendres ( %) Brix (%) Couleur Protéines (mg EBSA/100g) P1 3,73±0,81 0,43 1,88±0,16 5,15±0,01 0,1 2737,02±211,16 P2 2,89±1,59 0,44 1,75±0,42 4,14±0,02 0,15±0,01 2866,21±164,87 P3 3,43±0,41 0,35 1,79±0,43 5,1±0,01 0,29 2389,85±364,4 P4 4,55±1,53 0,41 1,29±0,32 5,18±0,03 0,25 3754,33±41,95 P5 2,90±0,31 0,34±0,15 5,2 0,24 1679,35±178,54 P6 4,06±0,77 0,51 2,38±0,02 5,1 0,18 2317,19±468,63 P7 2,74±0,85 0,42 2,87±0,05 5,06±0,01 0,11 2438,29±97,89 P8 2,70±0,67 0,3 2,35±0,08 5,01±0,01 0,49±0,01 1299,88±188,14 Les pollens renferment de faibles teneurs en eau, ce qui permet leurs meilleurs conservation, mais aussi leurs confèrent une stabilité chimique et enzymatique. Ils représentent aussi une source importante de protéines, pigments et minéraux.

Analyse pollinique Culot + gélatine glycériné 5g de pollen+20ml eau distillée Culot +10 ml eau distillée Culot + gélatine glycériné Centrifugation Observation

Analyse pollinique Les pollens analysés sont Multiflorals Lamiacées Brassicacées Apiacées Asteracées Oleacées Myrtacées

Composés bioactifs Les pollens sont riches en Polyphénols totaux notamment les pollens P 6 et P 8. Ils renferment aussi des flavonoïdes (P 2 et P 8) et des flavonols (P 1, P 2, P 6) La moitié des échantillons (P 1, P 2, P 3, P 8) ont des teneurs élevées en proanthocyanidines. Le pollen P 8 présente une teneur très élevée en caroténoïdes comparé à d’autres échantillons.

Activités antioxydantes P1 Pouvoir scavenger DPPH P6 - P1- P2 ABTS OH P6 – P2 – P7 Pouvoir réducteur FRAP P2 – P4- P8 PR Mo P6 – P4- P5 P2 P6

Activité anticancéreuse Activité cytotoxique Contrôle P2 40% P8 40% P6 36% P7 27% Tous les échantillons ont exercé une activité cytotoxique [250 µg/ml]

Activité anticancéreuse 2. Adhésion sur matrices protéiques [250 µg/ml] faible inhibition d’adhésion sur Vn et Fn 50% d’inhibition d’adhésion sur le Coll I

Conclusion et perspectives Les pollens analysés, de part leurs teneurs en protéines et minéraux, représentent une source importante en polyphénols et caroténoïdes. Ils sont dotés de plusieurs propriétés biologiques : Antioxydante (pouvoir scavenger et réducteur). Cytotoxique ( P7, P6, P8 et P2). Inhibition d’adhésion sur les matrices protéiques (50% d’inhibition sur Coll I). Perspectives Voir la possibilité d’introduire le pollen dans les différentes préparations alimentaires afin de les préserver et d’améliorer leurs qualités nutritionnelles. Créer une banque de données numérisées et photographiées des pollens d’Algérie à travers la confection des lames de référence.

Thème 4 : Propriétés physicochimiques et activités biologiques de quelques miels

20 échantillons de miel Propriétés physicochimiques Analyse pollinique Composés phénoliques Activités antioxydantes Activité antiproliférative Humidité Détermination de l’origine botanique des miels Composés phénoliques totaux Pouvoir scavenger des radicaux : Test de prolifération Cellules gliales tumorales U87 Brix DPPH pH ABTS Conductivité électrique Flavonoïdes OH Pouvoir rotatoire Pouvoir réducteur Couleur Protéines Proanthocyanidines A u ferricyanure de potassium Proline Phosphomolybdate HMF FRAP

Conductivité électrique Résultats et discussion 1. Paramètres physicochimiques Miels Humidité Brix pH Conductivité électrique Pouvoir rotatoire Couleur Protéines Proline HMF 1 14,7 83,1 3,9 0,8 -5,3 0,7 120,9 695,8 13,0 2 15,0 83,2 4,0 1,0 -2,9 139,2 754,5 10,9 3 17,4 80,9 3,8 0,9 102,5 910,4 8,9 4 15,6 82,9 -2,1 138,4 262,3 9,3 5 17,8 80,5 4,1 1,5 -4,5 146,3 460,0 10,4 6 17,5 80,8 1,3 -4,6 150,6 430,5 9,8 7 17,6 80,6 1,2 119,8 552,1 8 -6,6 160,3 535,7 9,9 9 80,7 -6,1 121,7 430,9 10,3 10 17,0 81,2 -5,9 48,9 463,0 14,0 11 19,0 79,5 4,2 1,1 -6,4 24,0 342,2 6,3 12 19,5 78,8 3,5 0,4 -4,4 0,1 80,4 209,5 13 16,5 81,1 -1,2 0,3 92,7 328,7 0,2 14 11,6 86,5 4,9 -7,0 165,5 701,3 15 15,5 82,7 4,4 0,6 -4,8 131,3 342,6 5,1 16 16,8 81,5 3,6 -6,8 0,5 127,5 680,1 16,1 17 80,3 4,3 -2,4 70,5 240,4 18 16,9 126,9 678,4 22,8 19 81,8 -6,7 1,4 122,7 712,7 20 -5,5 178,4 438,9 8.6 Humidité: < 20 % miels sont mûrs. Brix: > 65% miels conformes aux normes pH: miels acides, une caractéristique des miels de fleurs, Acides organiques Protéines: teneurs variables selon l’origine du miel : miellat ou de nectar Couleur: variable selon la composition en pigments (caroténoïdes, flavonoïdes) Proline : >180 mg/kg : miels mûrs et non falsifié HMF<40mg/kg : miels frais

10 miels Multiflorals 4 Eucalyptus 2 Fabaceae; 2 Ericaceae Résultats Origine floral des miels analysés Apiacées Ericacées 10 miels Multiflorals 4 Eucalyptus 2 Fabaceae; 2 Ericaceae 1 Caprifoliaceae; 1 Eucryphiaceae Borraginacées Astéracées

Teneurs en polyphénols Composés phénoliques totaux Flavonoïdes Proanthocyanidines 30 à 108 mg EAG/100 g 6 à 68 mg EQ/100 g 522 à 7978 mg EC/100 g M 19 M 11 M 20

Pouvoir scavenger des radicaux libres Activités antioxydantes Pouvoir scavenger des radicaux libres Pouvoir réducteur Tous les miels ont présenté un pouvoir réducteur du Fe3+en Fe2+ La réduction est élevée : M9, 11, 14, 19 & 20 Tous les miels ont la capacité à inhiber les radicaux: DPPH, ABTS et OH notamment les miels: M9, 11, 14, 19 & 20

Activité Antiproliférative Tous les extraits de miels ont inhibé la prolifération cellulaire et que cette inhibition est dose dépendante. À une concentration de 100 µg/ml, la prolifération a été fortement réprimée en présence des miels M2, M9-M14.

Conclusion et perspectives Les miels analysés sont mûrs, frais et conformes aux normes. La moitié ont une origine Multiflorale et présente une composition biochimique variable. Les miels contiennent différents composés polyphénoliques qui contribuent probablement à leurs activités antioxydantes et leur pouvoir antiproliférative. En perspectives De réaliser des essais sur l’effet cicatrisant du miel . D’identifier et d’isoler les molécules à activité anticancéreuse.

Thème 5: Détermination de l’activité anticancéreuse des extraits et fractions de quelques plantes médicinales Les plantes étudiées: Myrtus communis, Pistacia lentiscus, Globularia alypum, Eryngium maritimum, Marrubium vulgare et Scilla maritima. Lignées cellulaires utilisées: HT1080 (fibrosarcome) et U87 (gliosarcome). Tests réalisés: Test de prolifération. Test d’adhésion sur des matrices protéiques : Collagène I, Collagène IV, Fibronectine, Vitronectine, Laminine, Fibrinogène et L-lysine. Test MTT. Test de migration par vidéomicroscopie.

Travail en cours Les résultats obtenus jusqu’à ce jours sont prometteurs et ouvrent la voie vers la détermination des agents anticancéreux à base de plantes médicinales.

Contribution aux Projets Nationaux de Recherche Projets CNEPRU Attachée de recherche 2010-2013 Code N° : F00620090001 : « Caractérisation des substances actives d’espèces du genre Fumaria et étude des activités biologiques in vitro et in vivo » . (Projet de recherche achevé) Code N° : F00620090028 : « Activités antioxydantes et antibactériennes des polyphénols extraits de plantes médicinales de l’Afrique du nord  ». (Projet de recherche achevé) Chargée de recherche 2014-2017 Code N° : F00620130023 : « Caractéristiques physico-chimiques et propriétés biologiques des miels Algériens ». (Projet de recherche en activité). Proposition d'un projet CNEPRU (à partir 2016) :  «Valeurs nutritionnelles, effets cicatrisants et activités antimicrobienne, anti-inflammatoire et anticancéreuse des miels algériens».

V. Productions scientifiques

16 10 Nationales 6 Internationales Communications nationales et internationales 2016: Séminaire International de Pharmacie de Sétif (SIP2016), 11 et 12 mai, Setif, Algérie. Effets des feuilles et des baies de Myrtus communis (Myrtaceae) sur les activités enzymatiques des cyclooxygénase, acétylcholinestérase et xanthine oxydase. Auteurs: Amessis-Ouchemoukh, N., Ouchemoukh, S., Madani, K. Communication “orale” 2015: Séminaire national sur les substances bioactives, 18 et 19 novembre, Bejaia, Algérie. Inhibition of ROS produced by glioblastoma cells (U87-MG) and the determination of the anti-inflammatory and anti-acetylcholinesterase activities of some medicinal plants cultivated in Algeria. 2015: 2ème Congrès International de la Société Algérienne de Nutrition, 14 et 15 octobre, Alger, Algérie. Caractéristiques physico-chimiques et activités antioxydantes de quelques miels de Tizi-ouzou. 2013: Journées internationales de Biotechnologie, 21 et 24 décembre, Hammamet, Tunisie. New hydroxycinnamic acids and flavonoids from Algerian Marrubium vulgare L. characterized by HPLC-ESI-Q-TOF-MS. 2012: Journées internationales de Biotechnologie, 19 et 22 décembre, Mahdia, Tunisie. New iridoids and phenylethanoid glycosides from Algerian Globularia alypum L. 2012 : 2èmes Journées des Sciences de la nature et de la vie, 07 et 08 novembre, université de Béjaia. Characterisation of phenolic compounds by HPLC/MS coupled with QTOF-MS of the leaves of Globularia alypum L. 2011: Communication international ; 5th international conference on polyphenols and health. 17 et 20 octobre, 2011. Barcelone, Espagne. Targeted metabolic profiling of phenolics and iridoids in Globularia alypum. 2011 : Séminaire d’échange international, aux interfaces du développement durable, SEMAGRO TECH, 21 et 22 juin, Université de Bejaia. Pouvoir antioxydant des alcaloïdes totaux extraits à partir de quelques plantes médicinales de la région de Bejaia. 2010 : Journées d’études sur les Sciences de la nature et de la vie. 06 et 07 décembre 2010, Université de A.MIRA de Bejaia. Dosage des antioxydants et détermination de l’activité antioxydante de quelques plantes médicinales. 2008 : Séminaire national sur : Agriculture, Environnement et santé. Du 19 au 20 avril, Khemis Miliana. Etude comparative du pouvoir antioxydant des extraits de deux plantes médicinales : Myrtus communis et Retama sphaerocarpa. 2008 : Communication international « 1èr Colloque International sur les substances naturelles et innovations thérapeutiques ». Du 22 au 23 avril 2008, Mascara. Evaluation de l’activité antiradicalaire de quelques plantes médicinales. 2008 : Communication international « International Symposium on Biotechnology, ISB 2008-Sfax, Tunisia ». Du 04 au 8 mai 2008. Bioactifs components and antioxidants potential of Myrtus communis, Globularia alypum and Pistacia lentiscus. 2008. Séminaire national sur : Alimentation et Santé (SNAS). Du 13 au 14 mai, Sidi Bel Abbes. Activité antiradicalaire des extraits polyphénoliques de cinq plantes médicinales. 2008 : Communication international «Association Tunisienne de Biotechnologie, Les 7èmes Journées Biotechnologiques ». Du 15 au 18 décembre 2008 à Hammamet. Détermination du pouvoir antioxydant de Eryngium maritimum et Marrubium vulgare. 2007 : Communication Internationnal “International Symposium on phytomedecines and medicinal herbs” Du 17 au 19 mars à Constantine. Etude du pouvoir antioxydant de quelques plantes médicinales de Bejaia. 2007 : Communication Internationnal « Association Tunisienne de Biotechnologie, Les 6èmes Journées Biotechnologiques Hôtel RIU Bellevue Park El Kantaoui » 23 au 26 décembre 2007. Thème : Etude du pouvoir antioxydant de quelques plantes médicinales de Bejaia. 10 Nationales 6 Internationales 16

Publications internationales Au cours de la thèse (4) 1. Amessis-Ouchemoukh, N., Madani, K., Falé, L.V.P., Serralheiro, M.L., Araújo, M.E.M., 2014. Antioxidant capacity and phenolic contents of some Mediterranean medicinal plants and their potential role in the inhibition of cyclooxygenase-1 and acetylcholinesterase activities. Industrial Crops and Products 53, 6-15. 2. Amessis-Ouchemoukh, N., Abu-Reidah, I.M., Quirantes-Piné, R., Rodríguez-Pérez, C., MADANI, K., Segura-Carretero, A., Fernández-Gutiérrez, A., 2014. Tentative characterization of iridoids, phenylethanoid glycosides, and flavonoid derivatives from Globularia alypum L. (Globulariaceae) leaves by LC-ESI-QTOF-MS. Phytochemical Analysis 25, 389-398. 3. Amessis-Ouchemoukh, N., Abu-Reidah, I.M., Quirantes-Piné, R., Madani, K., Segura-Carretero, A., 2014. Phytochemical profiling, in vitro evaluation of total phenolic contents and antioxidant properties of Marrubium vulgare (horehound) leaves of plants growing in Algeria. Industrial Crops and Products 61, 120-129. 4. Rodriguez-Pérez, C., Quirantes-Piné, R., Amessis-Ouchemoukh, N., MADANI K., Segura-Carretero, A., Fernandez-Gutierrez, A., 2013. A metabolite-profiling approach allows the identification of new compounds from Pistacia lentiscus leaves. Journal of Pharmaceutical and Biomedical analysis 77, 167-174.

Publications après et hors thèse 3 Impact factor 3.45 Impact factor 2. 40 Impact factor 2. 71

2 Conférences Papers

Perspectives de Recherche et d’Enseignements

Perspectives de recherches Poursuivre et d’approfondir les travaux de recherches sur les différentes matrices étudiées (plantes médicinales, pollen, miels, blés et fruits sec). D’évaluer surtout in vivo leurs propriétés biologiques notamment celles liées aux traitements des cancers. Participer à la conception des projets de recherche nationaux et internationaux.

Perspectives pédagogiques Encadrer des étudiants en « Master» et appréhender les nouvelles questions de recherche. Elaborer de nouveaux polycopiés de cours à caractère pédagogique.

Remerciements Laboratoire 3BS, Univ. de Bejaia, Algérie (Chercheurs, ingénieurs , doctorants et étudiants) et particulièrement le Pr. MADANI K Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie, Univ. Bejaia (Doyen, Vice doyenne de la PG, Staffs administratifs et l'ensemble des Enseignants de la Faculté SNV et particulièrement le département des Sciences alimentaires. Professeur Maria Eduarda M. Araújo (Université de Lisbonne, Portugal) Professeur Antonio Segura-Carretero (Université de Grenade, Espagne) et Ibrahim M. Abu-Reidah (BERC, Til Nablus, Palestine) Professeur José Luis (Université de Aix-Marseille, France)

Que Dieu le tout puissant l’accueille en son vaste Paradis

Merci pour votre attention

SOUTENANCE HABILITATION UNIVERSITAIRE Université Abderrahmane Mira de Bejaia Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie Laboratoire de Biomathématiques Biophysique Biochimie et Scientométrie SOUTENANCE HABILITATION UNIVERSITAIRE Spécialité : Biologie Présentée par: AMESSIS-OUCHEMOUKH Nadia Devant le jury composé de : Président Mr MADANI Khodir Professeur U. Bejaia Examinateur Mr KEBIECHE Mohamed U. Jijel Mr ARRAR Lekhmici U. Sétif Examinatrice Mme KHETTAL Bachra Maître de conférences A Mr ZAIDI Farid Rapporteur Mme BOULEKBACHE Lila Mme AMELLAL Hayat U. Boumerdès Mme HAMRI Sabrina