ROLE DE BIOLOGISTE DANS L’APPROCHE PRE-ANALYTIQUE DES EXAMENS HISTOLOGIQUES REALISES EN PATHOLOGIE TUMORALE N. HABCHI

INTRODUCTION Le maintien de l’intégrité cellulaire est primordial pour la réalisation d’un examen anatomo-pathologique (1). Depuis son introduction par Ferdinand Blum en 1893, le formol est devenu le fixateur de référence pour la préservation des tissus pour une observation microscopique ultérieure, mais il a été classé "cancérigène du groupe 1" par le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC).

OBJECTIFS Mon travail s’intègre dans un projet visant à tester la substitution du formol pour les études immunohistochimiques, voir idéalement son remplacement par de nouveaux fixateurs. L’objectif de notre travail est de : montrer les méthodes d’optimisation de la phase pré-analytique au sein du laboratoire d’anatomie pathologique, comparer les effets de la fixation par trois types de fixateurs actuellement utilisés dans les laboratoires sur le contenu et l’intégrité des tissu, connaitre les causes de la difficulté de lecture des lames histologiques et résumer les risques professionnels liés à l inhalation du formol rapportés par la littérature.

Lieu de l’expérimentation MATERIEL ET METHODES Lieu de l’expérimentation HCA(services:neurochirurgie, endocrinologie et anatomie pathologique); PA( laboratoire de biopathologie); Hopital Neurologique de Lyon, le laboratoire d’embryologie et d’histologie moléculaire de Lyon INSERM U842 Lyon. Pièces d’exèrese chirurgicale proviennent : -Labo d’Anatomie Pathologique d’HCA, -Labo d’histologie et d’embryologie moléculaires (INSERM U842) de Lyon, Prélèvements fixés dans trois types de fixateurs: FORMOL TAMPONNÉ À 10% FORMOL ACÉTIQUE LIQUIDE DE BOUIN-HOLLANDE

Formol Tamponné 10% Bouin Hollande Formol Acétique Figure 1: Comparaison d’identification par réaction IHC des cellules prolactiniques d’un prolactinome fixé au formol tamponné à 10% à celle des prolactinomes fixés au formol acétique et au Bouin Hollande ; Objectif X40. FA FT FA BH

Formol Tamponné 10% Ac picrique FIXATION Liq Bouin Hollande++ Formol Acétique ++++ Formol Tamponné 10% Ac picrique

Dénature les protéines Formol -NH2 Méthylol CH2OH H+ Chaines Méthyléne Réunissent molécules protéiques Aldéhyde Gr Amine Dénature les protéines Gène Fixation =COV

EVALUATION DE TROIS SUBSTITUTS DU FORMOL Une équipe DE L'ÉCOLE VÉTÉRINAIRE AGROALIMENTAIRE DE NANTES a évalué la possibilité de substituer le formol dans les laboratoires d'anatomie pathologique. Trois substituts aux compositions représentatives des différentes solutions sur le marché (Acide acétique, glyoxal, mélange d'acide acétique/glyoxal) ont été testé en comparaison au formol sur un panel de 10 tissus biologiques d'animaux. BOVIN FEMELLE ADULTE CHIEN MALE ADULTE CHIENNE FEMELLE ADULTE ENCEPHALE TESTICULES TUMEUR MAMAIRE ESTOMAC FOIE INTESTIN MUSCLE FESSIER OS DES COTES PEAU

de coloration ( HES et colorations spécifiques) et d’immunomarquage. L 'évaluation des substituts s’est faite sur la base des caractéristiques des prélèvements lors des étapes de macroscopie, de microtomie, de coloration ( HES et colorations spécifiques) et d’immunomarquage. RISQUES LIES À L'UTILISATION CHRONIQUE DU FORMOL: Sensibilisation cutanée: eczéma+++, urticaire Sensibilisation respiratoire: rhinite, asthme+++ Cancer naso-pharyngé +++ Leucémie Chaque prélèvement a été immerge immédiatement dans un des quatre fixateurs: Exell plus à base de glyoxal RCL2 à base d’acide acétique Histofix à base d e glyoxal et d’acide acétique Formol à 4% Leurs résultats démontrent que tous les substituts utilisés possèdent des qualités de fixation suffisantes pour une observation histologique et permettent de proposer le diagnostic de routine après coloration HES. LE SUBSTITUT À BASE DE GLYOXAL PERMET D'OBTENIR DES PRÉPARATIONS HISTOLOGIQUES COMPARABLES À CELLES OBSERVÉES AVEC LE FORMOL, ASSURANT MÊME UNE MEILLEURE QUALITÉ DE FIXATION SUR CERTAINS TISSUS TEL QUE LE TISSU OSSEUX (2).

CONCLUSION Il ressort de la comparaison de nos résultats avec la littérature que les difficultés d’interprétation des observations peuvent être secondaires à divers artéfacts relatifs au mode de fixation et qu’il y a nécessité de répondre à la mise en place de mesures de protection et des normes de sécurité dans les nos laboratoires afin de minimiser les risques associés à l'utilisation du formol. Chaque laboratoire devra évaluer la possibilité de substituer le formol en fonction des techniques qu' il utilise couramment