FORUM REGIONAL POUR LE DEVELOPPEMENT DES LEGUMINEUSES ALIMENTAIRES Mostaganem - Algérie, 28, 29 et 30 novembre 2016 Utilisation de la biotechnologie végétale pour l’amélioration productive in vitro de la semence de pois chiche (cicer arietinum) GHOMARI.S* (1), HAMDI.S (2), HADDAD.M (1), BENJEDDA.M (2), LEBID.A (1), DELLAOUI.S (1). 1* : Université de Djillali Liabès, S.B.A, associé à la Division Agrosystème Ouest et Steppes, Sidi Bel Abbés ; samia ghomari22@gmail.com 2 : Attaché de recherche à l’Institut National de la Recherche Agronomique (INRAA), Division Agrosystème Ouest et Steppes, Sidi Bel Abbés Résumé : Le pois chiche est une légumineuse d’une grande valeur nutritive indéniable. Sa culture a connu un développement très important en Algérie, malgré des rendements irréguliers. L’amélioration variétale de cette espèce passe la multiplication in vitro, technique rapide et permettant d’assainir le matériel végétal de tous types de maladie. Dans ce cadre, notre étude consiste à mettre au point la technique de culture in vitro pour deux lignées de pois chiche GP10 et F10-5/11, afin d’obtenir des vitroplants sains et capables de s’adapter  in vivo. Afin de répondre à cet objectif, trois méthodes de désinfection, et de deux méthodes de mise en culture sont testées. Les critères retenus pour le suivi des deux lignées sont ;  l’évaluation  de la longueur de la tige, le nombre de nœuds, le nombre de feuilles en  sur  deux générations. Les résultats obtenus sont très encourageants, absence de contamination par l’application d’une  troisième méthode de désinfection et le repiquage uniquement de l’embryon zygotique germé et débarrassé de ses cotylédons. A l’échelle in vitro, le facteur génotype intervient directement sur la croissance caulinaire des vitroplants à travers les générations. La lignée GP10 est la plus propice pour une micropropagation du pois chiche. Cette étude favorise le passage de la micropropagation de la semence à l’amélioration variétale par d’autres techniques in vitro comme le microbouturage.   Mots clés : Cicer arietinum, culture in vitro, lignées, GP10, F10-5, vitroplants. INTRODUCTION Le pois chiche est de la famille des Fabacées, cultivé dans les régions méditerranéennes pour ces graines comestibles par leur richesse en glucides et en protéines. Sa culture est en voie de relance en Algérie. C’est une culture très sensible à l’anthracnose (Addi.N, 2010). La culture in vitro est l’une des techniques récentes, permettant l’assainissement des plantes de toutes maladies existantes. L’objectif de cette étude est la mise au point de cette technique à partir de la pré-germination de graines de deux lignées. Ainsi, trois méthodes de désinfection et deux méthodes de la mise en culture sont testées. Mise en culture Incubation Graines désinfectées Graines germée Prélèvement de l’embryon MATÉRIEL & MÉTHODES Figure 2: mises en culture des graines de pois chiche Matériel végétal : Deux lignées sont fournies par l’INRAA de Sidi Bel Abbés, la F10- 5 (à petit calibre) et la GP10 (à gros calibre) (figure 1). Milieu de culture : Le milieu de culture de base utilisé dans nos essais, est celui de MS (Murashige et Scoog, 1962) avec la modification des vitamines avec ceux de Morel et Wetmor (1951). RESULTAS ET DISCUSSION Les résultats de la désinfection a révélé que la méthode 3 est la plus fiable, avec 0% de contamination. Les méthodes 1 et 2 ont présenté un taux de contamination respectivement de 100 % et de 80 %, et cela chez les deux lignées après 30 et 25 jours de la mise en culture. Les techniques testées dans cette présente étude, ne sont pas utilisées par les chercheurs de cette espèce. C’est le cas de Dellal (2014), auquel la désinfection a été appliquée sur des explants de tige prélevés in vivo de jeunes plantes de 21 jours de croissance. Les courbes de croissance des deux lignées ont mis en valeur l’effet du génotype sur la micropropagation de la GP 10 et de la F 10-5. Un développement précoce a été enregistré pour la GP 10, avec une croissance caulinaire dépassant de 1 ± 0,5 cm la F10-5. Cette différence a été enregistrée au niveau de la 1ère et la 2ème génération des vitroplants. Cette différence se répercute sur le nombre de nœuds et des feuilles qui reste nettement supérieur chez la GP 10 (figure 3). Figure 1: lignés de pois chique GP10 et F10-5 Méthodes de désinfections Méthode 01 : après mouillage des graines dans l’eau distillée stérile pendant 10 min, puis dans l’eau distillée, avec 2 gouttes de savon liquide durant 5 min, les graines sont replacer dans le désinfectants Aciderme à 30% durant 3 mn, pour finir avec deux rinçages de 5 mn chacun (Ghomari et al., 2013). Méthode 02 : la même procédure de la méthode 1 est réalisée, mais nous avons remplacé la solution d’Aciderme avec l’hypochlorite de sodium à 13° pendant 5 mn ; Méthode 03 : les graines sont trempées dans l’eau distillée stérile durant 10 min, puis placées dans l’eau de javel à 13° durant 5 mn ; et enfin 5 rinçages successifs de 5 mn chacun sont effectués. F10-5 GP 10 Figure 3: vitroplants des lignées F10-5 et GP10 CONCLUSION La micropropagation des lignées de pois chique F 10-5 et GP 10, nécessite la mise au point des techniques de désinfection et de la mise en culture des graines. Ainsi, l’utilisation de l’hypochlorite de sodium à 13°, suivie d’une prés-germination des graines en conditions stériles, a favorisés une absence totale des contaminations. Ainsi, la lignée GP 10 est plus favorable en culture in vitro que la lignée F 10-5. A l’échelle in vitro, le facteur génotype intervient directement sur la croissance caulinaire des vitroplants à travers les générations. La lignée GP 10 est la plus propice pour une micropropagation du pois chiche. Méthodes de la mise en culture : Méthode 1 : emplacement des graines dans le milieu de culture stérile puis mises en incubation en conditions favorables ; Méthode 2 : placer les graines dans les tubes à essais stériles contenant 2 à 3 ml d’eau distillées stérile et puis mises en incubation en conditions favorables. Après pré-germination, les embryons des graines de pois chiche sont prélevés pour être repiqués en milieu de culture stérile (figure 2). REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Addi.N, 2010. Etude des effets du filtrat filtré d’Ascochyta arabiei (Pass)Lab. Sur des cals de pois chiche (Cicer arietinum L.). mémoire de magister en Biologie, spécialisté : Microbiologie. Université d’Oran. Pp : 9-10. Murashige T. et F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures. Physiol Plant., 15, 473–497. Morel G. et R.H. Wetmor. 1951. Ferncallus tissue culture. Ann.J. Bot., 38, 141-143. In: Haïcour R., 2002. Multiplication de plantes herbacées in vitro modèle Solanum tuberosum L, Biotechnologie végétale, techniques de laboratoire. Londres, Paris, New york: TEC & DOC., 1-16. Ghomari.S et al., 2013. Effect of 2.4-D Phytohormone on Neoformation of Somaclonal Variants in Solanum tuberosum L. Advances in Environmental Biology, 7(14) December 2013, Pages: 4697-4702. Dellal. A, 2014. Contribution à l’étude de la tolérance à l’anthracnose (Ascochyta arabiei) de quelques génotypes de pois chiche (Cicer arietinum) dans la région de Sidi Bel Abbés, mémoire de Master 2, option gestion et valorisation des ressources biologiques université Djillali Liabès. Pp :12, 17, 18.