Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II 11 Juillet 2006 Stéphanie COCHAUD

Curriculum Vitae Stages réalisés : 2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B 2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie. Parcours : Biologie Moléculaire et Génétique. Mention B 2003-2004 : Licence Physiologie, Biologie Cellulaire et Moléculaire. Mention B 2001-2003 : DEUG Sciences de la Vie. Mention B Stages réalisés : Master 1: Laboratoire des Biomembranes et signalisation (CNRS-UMR 6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS Master 2 : Laboratoire Interactions et communications cellulaires (CNRS-UMR 6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS

Stages Master 1et Master 2 Sujet de Master 1 : Régulation de l’expression de gènes de facteurs transcriptionnels lors de la différenciation des cellules de neuroblastomes SH-SY5Y induite par le VIP. Sujet de Master 2 : Modification de l’expression génique dans la lignée cellulaire tumorale pulmonaire NCI-H157 après réexpression de la sémaphorine SEMA3F Formation : - Culture cellulaire - RT-PCR classique et quantitative - Séquençage - Immunofluorescence - Dosage ELISA - Western blot

Projet de recherche Fonction anti-métastasique de KAI1/ CD82, une protéine de la famille des tétraspanines

Les tétraspanines Forment une superfamille de protéines Impliquées dans de nombreuses fonctions Levy et Shoham, Physiology (2005).

La tétraspanine KAI1/CD82 Identifiée au cours de l’étude de l’activation des cellules T Protéine ubiquitaire Impliquée dans la cancérogénèse

Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82 Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire MMP9 Jee et al., BBRC (2006) KAI1/CD82 Intégrines β1 Intégrine α6β1 Src P Baisse de l’adhérence cellulaire CAS FAK P P Inhibition de la migration cellulaire He et al., J. Biol. Chem. (2005) Sridhar et Miranti, Oncogene (2006)

Problématique Quels sont les mécanismes intervenant dans l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ?

Les objectifs 1. Etudier in vivo l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82. 2. Déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu

Approche in vivo

Cellules parentales : PC3 Réexpression de KAI1/CD82 Clones réexprimant KAI1 pCDNA3.1-KAI1 Sélection des clones par G418 Expression de KAI1 par Western blot et par FACS Cellules parentales : PC3 Clones contrôle pCDNA3.1-KAI1 (vecteur vide)

Etude in vivo de la réexpreesion de KAI1 Clones réexprimant KAI1 Etude de la formation des métastases Etude du volume de la tumeur Etude de la vascularisation de la tumeur Injection sous cutanée Clones contrôle Souris nude BALB/c

Résultats attendus Absence de métastases après réexpression de KAI1/CD82 Volume tumoral inchangé après réexpression de KAI1/CD82 Vascularisation tumorale inchangée après réexpression de KAI1/CD82 L’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ne serait pas du : - à une activité anti-proliférative - à une activité anti-angiogénique Mais, en empêchant la migration et l’invasion cellulaire.

Approche in vitro

Etude de la migration cellulaire Anticorps 8A2 Anticorps P5D2 KAI1/CD82 Perte de l’adhérence : (- test d’adhérence) (- test de migration) ? Intégrines β1 DOCK180 Crk CAS P ? Src P P CAS (Immunoprécipitation) FAK P Rac-GDP Réorganisation de l’actine (migration cellulaire) Rac-GTP (Pull-Down) (Immunofluorescence)

Résultats attendus Perte d’adhérence et perte de la migration cellulaire Inhibition de la voie Src/FAK/CAS/Dock 180 Diminution de l’activité des petites protéines G Modifications de la morphologie cellulaire Mise en évidence de KAI1 dans l’inactivation d’une voie de signalisation impliquée dans la migration cellulaire.

Conclusion Utilisation de 2 approches (in vivo et in vitro) Activité anti-métastasique de KAI1 Meilleure compréhension de KAI1 Perspectives : Quelles sont les parties structurales nécessaires à la fonction de KAI1? Quels sont les facteurs entraînant la perte d’expression de KAI1?

KAI1/CD82 : un supresseur de métastases Merci de votre attention

Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82 Liu et Zhang, Cancer Letters (2006)