Rétrotranscription Cette étape du cycle est réalisée par une enzyme virale L'enzyme virale = reverse transcriptase hétérodimère : p66/P51 en forme de main 1 mutation toutes les 1000 ou 10 000 bases synthétisées Les activités enzymatiques de la RT sont: ADN-polymérase/ ARN-dépendante ADN-polymérase/ ADN-dépendante Et Rnase H p66 polymérase Rnase H ADN ARN viral p51 Inhibiteurs de la RT Analogues nucléosidiques ou inhibiteurs non nucléosidiques

Cinétique de la synthèse du double brin d’ADN = OPERATION COMPLEXE 1ère étape: initiation du brin (-) d’ADN 2ème étape: saut de brin la RT s’attache et se détache (erreur) 3ème étape: dégradation de la matrice d’ARN par la RNAse H I I I I I I I R U5 PBS U3 R gag pol env ARN ARN t amorce R’ U5’ ADN I I I I I I I PBS U3 R gag pol env ARN ADN R’ U5’ I I I I I PBS U3 R gag pol env ARN ADN U3’ R’ U5’ PPTc PPT

Cinétique de la synthèse du double brin d’AND 4ème étape: initiation du brin (+) d’ADN 5ème étape: saut de brin 6ème étape: provirus linéaire synthétisé avec les 2 LTR PPTc PPT I I I I I PBS’ gag pol env ADN U3’ R’ U5’ U3 R U5 PBS U3 R U5 PBS I I I I I PBS’ gag pol env ADN U3’ R’ U5’ I I I I I I I I U3 R U5 PBS gag pol env U3 R U5

Variabilité des virus 30 % 8O% 50% Sélection d’un virus qui échappe La multiplication du virus ne se fait pas de manière fidèle, chaque nouveau virus n’est pas exactement identique à son parent Comme beaucoup de nouveaux virus sont produits chaque jour, cela provoque de la diversité et différentes familles de virus coexistent dans l’organisme 30 % 7% 50% 5% 10% en quelques jours…. 8O% en quelques semaines…. Mélange en équilibre instable De virus génétiquement différents mais voisins Réponse Immunitaire Sélection d’un virus qui échappe à la réponse immunitaire

Analogues nucléosidiques Analogues nucléotidiques Traitement par des analogues des bases naturelles: nucléosidiques ou nucléotidiques Analogues de : Analogues nucléosidiques Analogues nucléotidiques Thymidine AZT (Rétrovir) d4T (Zérit) FLT (Alovudine) Adénine ddI (Videx) Adéfovir TDV (Viread) Cytosine ddC (Hivid) 3TC (Epivir) FTC (Emtricitabine) Guanine ABC (Ziagen) DAPD

schéma de l' AZT L'AZT (azidothymidine) est un analogue de la Thymidine. .

Les analogues des bases naturelles sont: des terminateurs de chaînes 3’ Synthèse d’ADN avec incorporation d’une base naturelle L’extrémité OH libre permet l’ incorporation d’une nouvelle base naturelle N3 Si on incorpore un analogue, il n’y aura plus d’extrémité OH ===> arrêt de la synthèse du brin d’ADN Les analogues des bases naturelles sont: des terminateurs de chaînes

Mécanismes de la résistance aux analogues 1- diminution d’affinité de l’analogue 2- excision de l’analogue après incorporation NON

Phase précoce du cycle réplicatif Phase tardive du cycle réplicatif Liaison au récepteur et fusion Décapsidation ARN Phase précoce du cycle réplicatif Rétrotranscription ADN Intégration Phase tardive du cycle réplicatif Transcription et épissage Traduction Bourgeonnement Maturation

Intégration du Provirus dans l’ADN cellulaire 1 - L’intégrase clive les extrémités du provirus U3 R U5 CA TT GTAA AATG TT AC Après passage de la membrane nucléaire Il va y avoir intégration du provirus dans l'ADN cellulaire grâce à une enzyme virale => l’ intégrase virale UIOOPQSDFGHJK 2 - L’intégrase clive le chromosome cellulaire 3 - L’intégrase met en contact l’ADN virale et cellulaire Mais se sont les enzymes cellulaires qui réparent l’ADN UIOOPQSDFGHJK U3 R U5 AATG AC CA GTAA Anti-intégrase

Transcription des ARNm viraux Start de transcription Stop de transcription L’ADN virale étant intégré dans l’ADN cellulaire cette étape de transcription va être réalisée grâce aux ARN polymérases cellulaires: le virus “profite” de toute la machinerie cellulaire Les ARNm viraux ont: Un seul site de déclenchement (LTR5') et de fin de la transcription (LTR3') mais l'épissage (découpages et réassemblages) permet d’obtenir de nombreux ARNm codant pour différentes protéines virales ARNm

Traduction des protéines de structure Polyprotéines gag et gag-pol Polyprotéines immatures => maturation par la protéase virale après l’étape de bourgeonnement (cf après) Polyprotéine env Subit les modifications post-traductionnelles commes une autres protéines cellulaires Cad glycosylation et clivage par une protéase cellulaire (dans l’appareil de Golgi)

Clivage protéolytique des précurseurs gag et gag-pol La protéase virale est absolument essentielle pour la maturation du virion Elle clive les polyprotéines gag et gag-pol Elle est active sous forme dimérique p17 p24 p7 p6 p17 p24 p7 p6 Pr RT INT Antiprotéases

Protéase virale dimérique (bleu et rouge) L’inhibiteur de protéase (en jaune) se fixe sur le site actif de l’enzyme

Maturation du virion

Microscopie électronique Nouveaux virus La cellule CD4+

Aspects quantitatifs de la multiplication virale (malades entre 50 et 400 CD4/mm3) Demi-vie du virus 6 heures Virémie 104 - 107 virus/ml Production de particules virales 109 - 1011 /jour Durée d’un cycle de réplication 1,5 jours