Uriel Y. Moreno-Nieves PhD Student DC infected by the ANRS MVAHIV vaccine candidate prime NK cells with anti-HIV specific activity through a mechanism involving NKG2D and NKp46 on NK cells and membrane-bound IL-15 on DC Uriel Y. Moreno-Nieves PhD Student

Introduction NK cells : Cross-talk NK/DC: Anti-viral activity. First line of defense against viral pathogens. Increasing evidence of adaptive immune features. Cross-talk NK/DC: Activation of NK cells. Important for the induction of adaptive immunity. MVA : Modified Vaccinia virus Ankara Attenuated, non-replicating poxvirus. MVAHIV : expression of Gag, Pol, Nef peptides.

Background and Objectives NK cells stimulated by MVAHIV-infected DC are able to better control HIV infection in DC. Objectives: To test control of HIV-1 infection in other cell types by MVAHIV-stimulated NK cells. To investigate the mechanisms of anti-HIV specific priming of NK cells.

Addition of DC and NK cells Material and methods CD4+ T cells PBMC Ficoll Magnetic separation NK cells Blood from Healthy donors Differentiation 7 days Monocytes DC Addition of DC and NK cells after 18 hours Control of HIV infection DC CD4+ T cells Analysis of anti-HIV specificity Infection of DC by MVA Priming of NK cells 4 days

Control of HIV infection by NK cells is increased after MVAHIV priming HIV-infected DC Priming of NK cells 4 days Control of HIV infection DC CD4+ T cell Analysis of anti-HIV specificity Message: Le priming induit un meilleur contrôle de l’infection VIH dans les DC et dans les T CD4. CMV-infected DC HIV-infected CD4+ T cells Day 6 p.i. n=10 Day 7 and Day 10 p.i. n=8 and n=10

Priming of NK cells by MVAHIV is modulated by NKG2D HIV-infected DC HIV-infected CD4+ T cells Message: (Rmq: La figure sur le contrôle dans les DC, je l’ai fait à partir des données que j’ai compilé des expériences de JS, AG et miennes. Il y a une ressemblance à celles de la Fig 7B de l’article mais ce n’est pas la même figure…) Le blocage de NKG2D pendant le priming MVA-HIV induit une perte de contrôle VIH dans les DC et dans les T CD4+. (Il y a aussi une tendance, mais non-significative, quand NKG2D a été bloqué pendant le priming MVAwt). Le blocage de NKp46 pendant le priming MVA-VIH induit une augmentation du contrôle VIH dans les DC (pas dans les T CD4+). Donc, l’engagement de NKG2D est important pour l’induction d’un priming (specifique anti-VIH). Tandis que l’engagement de NKp46 pendant le priming par MVA-VIH limite le control de l’infection VIH dans les DC (mais pas dans les T CD4+)! Day 7 p.i. n=8 Day 9 p.i. n=10

NKG2D blockade during MVA priming decreases mbIL-15 expression on DC Expression of mbIL-15 on DC during MVA priming Modulation of mbIL-15 on DC by NKG2D and NKp46 Message : L’infection des DC par MVA(VIH et WT) induit une augmentation significative de l’expression de mbIL-15 dans les DC. NKG2D (et NKp46) modulent l’expression de mbIL-15. Le blocage de NKG2D diminue l’expression de mbIL-15. Le blocage de NKp46 augmente l’expression de mbIL-15. Le blocage de IL-15, NKG2D et IL-15+NKG2D pendant le priming MVA-HIV induit une perte de contrôle de l’infection VIH dans les T CD4+. Le blocage de NKp46 et IL-15+NKp46 pendant le priming MVA-HIV n’induit pas une perte du contrôle. Le blocage de IL-15, NKG2D, IL-15+NKG2D, NKp46 et IL-15+NKp46 pendant le priming MVA-WT n’induisent pas de perte/augmentation significative du contrôle de l’infection VIH dans les T CD4. Donc, il semblerait que la perte de contrôle induite par le blocage NKG2D pendant le priming MVA-VIH est due (au moins en partie) à la diminution de l’expression de mbIL-15 dans les DC. RMQ: Une question se pose: pourquoi il n’y a pas de perte de contrôle quand on bloque IL-15+NKp46… peut-etre parce qu’il a besoin que NKp46 soit engagé pour que les NK répondent à l’IL-15??! 24, 48 and 72 hours of priming n=7 72 hours of priming n=5

IL-15 is important for the MVAHIV priming Implication of NKG2D and mbIL-15 during MVA priming Message : L’infection des DC par MVA(VIH et WT) induit une augmentation significative de l’expression de mbIL-15 dans les DC. NKG2D (et NKp46) modulent l’expression de mbIL-15. Le blocage de NKG2D diminue l’expression de mbIL-15. Le blocage de NKp46 augmente l’expression de mbIL-15. Le blocage de IL-15, NKG2D et IL-15+NKG2D pendant le priming MVA-HIV induit une perte de contrôle de l’infection VIH dans les T CD4+. Le blocage de NKp46 et IL-15+NKp46 pendant le priming MVA-HIV n’induit pas une perte du contrôle. Le blocage de IL-15, NKG2D, IL-15+NKG2D, NKp46 et IL-15+NKp46 pendant le priming MVA-WT n’induisent pas de perte/augmentation significative du contrôle de l’infection VIH dans les T CD4. Donc, il semblerait que la perte de contrôle induite par le blocage NKG2D pendant le priming MVA-VIH est due (au moins en partie) à la diminution de l’expression de mbIL-15 dans les DC. RMQ: Une question se pose: pourquoi il n’y a pas de perte de contrôle quand on bloque IL-15+NKp46… peut-etre parce qu’il a besoin que NKp46 soit engagé pour que les NK répondent à l’IL-15??! Day 9 p.i. n=8

Conclusions NK cells primed by MVAHIV have increased anti-HIV activity. Better control of HIV infection in DC and CD4+ T cells. MVAHIV priming seems to be anti-HIV-1 specific. NKp46 blockade during MVAHIV priming enhances subsequent control of HIV infection in DC. NKG2D engagement during MVAHIV priming is important for subsequent control of HIV infection in DC and CD4+ T cells. NKG2D regulates mbIL-15 expression on DC. IL-15 is important for MVAHIV priming. Decreased mbIL-15 expression after NKG2D blockade during MVAHIV priming might be responsible for the decreased control of HIV infection in CD4+ T cells. Possible contribution of NK cells in vaccine efficacy.

Françoise Barré-Sinoussi Acknowledgements Daniel Scott-Algara Françoise Barré-Sinoussi Yves Lévy Jean-Saville Cummings Vincent Arnold Adrien Gilbert Kevin Yarbrough Céline Didier Thank you!