Service d’hémobiologie TD:2 CHU Oran Service d’hémobiologie TD:2 CHU Oran Frottis sanguin périphérique Normal

I. DEFINITION : ► La formule numération sanguine est l'examen biologique qui permet de comptabiliser les différents éléments figurés du sang, c'est-à-dire les globules rouges, les globules blancs et les plaquettes. ► L'étude des cellules sanguines est faite classiquement au microscope sur des frottis colorés. Actuellement les appareils automatiques se généralisent et quel que soit leur principe, ils donnent tous des appréciations quantitatives des différents éléments ainsi qu'une formule leucocytaire.

II. INDICATION DU FSP : II. INDICATION DU FSP : Le FSP doit être systématique devant toute FNS anormale; il permet de: Le FSP doit être systématique devant toute FNS anormale; il permet de: ► confirmer la formule automatique. ► Trouver des anomalies érythrocytaires (forme, taille, homogénéité, inclusions…). ► Montrer d’éventuelles cellules médullaires circulantes. ► Détecter les cellules anormales. ► Voir d’éventuels agrégats plaquettaires.

III. CONFECTIONNEMENT DU FROTTIS SANGUIN obtenir sur une lame de verre une couche unicellulaire d'éléments figurés du sang répartis sur tout le frottis et fixés dans l'aspect le plus proche de leur état physiologique

b) Positionner la lame de façon à prendre la totalité de la goutte. La laisser se répartir de façon homogène le long du biseau. c) Appliquer un mouvement de translation horizontale rapide en maintenant la spatule d’un angle de 45° environ sans appuyer tout au long de la lame. D) Sécher par agitation pour fixer temporairement les cellules a) Déposer une gouttelette de sang près de l’extrémité d’une lame

► Remarque:. Il est important d’utiliser des lames bien dégraissées pour éviter la production d’agrégats cellulaires et les dépôts de colorant.. Lors du dépôt de l’échantillon, la quantité de sang ne doit pas être excessive, sinon les globules rouges pourraient cacher les leucocytes.

Caractéristiques d’un bon frottis: de bonne taille (½ à ¾ de la lame) de bonne densité goutte étalée en entier, distant des bords de la lame donc accessible en tout point à l’observation microscopique

e) Coloration du Frottis sanguin: May Grünwald Giemsa L'action des ions acides et basiques obtenus après dissociation par de l'eau neutre de deux colorants alcooliques (méthanoliques) -le May Grünwald (éosine – bleu de méthylène) -le Giemsa (éosine – azur de méthylène) sur les éléments cellulaires complémentaires permet d'obtenir quatre affinités : - trois orthochromatiques Acidophile: du gris au légèrement rosé Basophile: violet foncé au noir Neutrophile: rose-violet - une métachromatique Azurophile: rose-rouge

IV. L’examen du frottis sanguin faible grossissement (obj.x40) permet d’apprécier la qualité du frottis Études Cytologiques: obj.x100 à l’immersion. - observer les éventuelles anomalies morphologiques des GR: anomalies de forme, de taille, de coloration, la présence d’inclusions intra-érythrocytaires. -observer les éventuelles anomalies morphologiques des plaquettes (taille, forme), la présence éventuelle d’amas plaquettaire, et confirmer la densité de la numération plaquettaire. -Effectuer la Formule Leucocytaire -penser aussi aux Parasites sanguins intra éryhthrocytaires (Plasmodium) ou extra-érythrocytaires (Trypanosomes, Microfilaires)

Parcours du frottis sanguin en vue de la réalisation d’une formule leucocytaire La formule leucocytaire correspond à la distribution des différentes variétés leucocytaires identifiées le long d’un parcours qui tient compte de la distribution des globules blancs lors de l’étalement (les granulocytes et les monocytes sont plus fréquemment rencontrés sur les bords et en bout de frottis). Cette distribution doit être représentative de la répartition physiologique des leucocytes. Identifier ainsi 100 (ou 200) leucocytes minimum et calculer le pourcentage des différentes variétés Calculer à l’aide de la numération des leucocytes les valeurs absolues indispensables à l’interprétation de la formule leucocytairevaleurs absolues

Remarques : Des leucocytes immatures (ou anormaux) peuvent être identifiés lors du parcours. Exemple: myéloblastes, promyélocytes, myélocytes,…. ils sont à inclure dans le pourcentage et à introduire dans le % de la formule leucocytaire. Des érythroblastes (souvent Erythroblastes acidophiles ou polychromatophiles) peuvent être également rencontrés ; Cependant les éryhthroblastes ont été dénombrés lors de la numération automatisée des GB, comme des cellules nuclées, et il est nécessaire d'effectuer une correction de cette numération, afin qu’elle ne corresponde uniquement qu’à celle des leucocytes.une correction

Aspect général : taille 7,3 µm en moyenne, forme ronde Noyau : absent Cytoplasme : affinité acidophile, gris rosé à centre décoloré, sans granulations Globules rouges V. Aspects des cellules dans un frottis sanguin périphérique normal :

Aspect général : taille 1 à 3 µm plus grosses sur anticoagulant forme irrégulière Noyau : absent Cytoplasme : affinité basophile clair, granulations fines, indiscernables, nombreuses, azurophiles. Plaquettes

Aspect général : taille 12 à 14 µm forme arrondie Noyau : taille N/P = 1.le plus souvent deux ou trois lobes.chromatine dense à mottes allongées Cytoplasme : affinité acidophile clair, granulations très nombreuses, fines, irrégulières, dispersées et neutrophiles Granulocyte ou polynucléaire neutrophile (PN)

Aspect général : taille 12 à 14 µm forme arrondie Noyau : taille N/P = 1.le plus souvent deux ou trois lobes.chromatine dense à mottes allongées Cytoplasme : affinité acidophile clair granulations moyennes, rondes, nombreuses, parsemant le cytoplasme Granulocyte ou polynucléaire eosinophile (PE)

Aspect général : taille 11 à 13 µm forme arrondie Noyau : taille N/P > 1 deux ou quatre lobes ronds se recouvrant.chromatine dense à mottes allongées Cytoplasme : affinité acidophile clair granulations peu nombreuses, recouvrant partiellement le noyau, parsemant le cytoplasme, violet-noir Granulocyte ou polynucléaire basophile (PB)

Aspect général : taille 9 à 11 µm forme arrondie Noyau : taille N/P >> 1 rond, chromatine dense Cytoplasme : mince couronne périnucléaire, affinité basophile clair, sans granulations Petit Lymphocyte

Aspect général : taille 10 à 15 µm forme arrondie mais déformable, souvent des côtés plats Noyau : taille N/P >= 1 rond, chromatine légère, mais d’aspect lisse Cytoplasme : affinité basophile clair, presque transparent, sans granulations ou avec quelques granulations azurophiles Grand Lymphocyte

Aspect général : taille 18 à 21 µm forme arrondie mais très déformable, Noyau : taille N/P < 1 forme très variable, souvent encoché, chromatine légère et filamenteuse Cytoplasme : affinité basophile clair, avec granulations indiscernables azurophiles mais très nombreuses donnant un aspect de cytoplasme gris sale, parfois vacuolé. Monocyte