Comment pourrait on obtenir un nouveau recombinant Myxo-VHD
Virus de la VHD 40 nm ARN simple brin 7437 bases VHD 125 fois moins volumineux que celui de la myxo Virus de la Myxomatose 2OO nm ADN double brin 161 773 Paires de bases
Virus pathogène de la VHD Structure déterminée aux rayons X . La capside que l’on voit est uniquement constituée d’une même protéine repétée plusieurs fois (VP60, 579 aminoacides). Le code est à l’intérieur sous la forme du brin d’ARN de 7437 b.
VHD souche Pascal Harlaud 1/ Foie de lapin mort de la VHD envoyé par Pascal Harlaud.
2/ Extraction de l’ARN viral broyage, centrifugation, purification
3/ Transcription en ADN Le code VHD est un ARN simple brin. (7437b) ReverseTranscriptase-PCR Le code VHD est un ARN simple brin. (7437b) Il est fragile. Nous l’avons traduit en ADN double brin, plus stable pour l’étudier et le modifier.
4/ Lecture du code ADN a) description du code (4 lettres A, T, C, G) à Double brin
b) Lecture du code Vert = A Noir = G Rouge = T Bleu = C
Code des 7437 pb de l’ADN complémentaire du virus VHD Pascal H.
Nous avons Identifié et isolé la seule partie du code qui exprime la protéine VP60.
En rouge les1737 pb du gène de la VHD codant pour la VP60
Travaux réalisés pour cloner le géne de laVP60 Genome viral complet Extrait du foie d’un lapin Envoyé par Pascal. Vecteurs de clonage Bluescript II (plasmides) DNA 3000 Pb Capables de vectoriser les DNA fraction du génome Correspondant à la VP60 Ligation de l’ ADN du génome avec le vecteur de DNA P.VP60 plasmide recombiné Incorporation dans une bacterie Multiplication du plasmide par la bactérie. Et extraction du plasmide. (nous avons maintenant cet objet)
Constructions des vecteurs de transfert OK. Génome du virus de la Myxo (BE4) 161 773 bp Géne de la Thymidine kinase PCR TK Gauche TK Droit Génome RHDV pTK PBluescriptII LacZ piv86 P.VP60 K1L Digestion K1L LacZ P7.5 promoteur TK LacZ donne bgal K1Lpromoteur VP60 TK TK pTKVP60 pTKLacZ P7.5 TK Digestion Nous avons cet objet Nous avons cet objet pTG2131 Constructions des vecteurs de transfert OK. Nous ne sommes pas allés vers le recombinant. (1 an de travail supplémentaire si on veut)