Les protéines plasmatiques IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Protéines plasmatiques Groupe hétérogène sur différents plans: STRUCTURAL: Environ 300 protéines dans le plasma holoprotéines glycoprotéines lipoprotéines IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Protéines plasmatiques Groupe hétérogène … FONCTIONNEL: différents rôles Pression oncotique Transport spécifique / non spécifique Inhibition de protéases plasmatiques, tissulaires Coagulation Immunité humorale (Ig) Système tampon du sang IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Protéines plasmatiques Groupe hétérogène … CONCENTRATIONS: « prédominantes » 10 - 40 g / L albumine, IgG « majeures » 1 - 10 g / L Fibrinogène, Transferrine, IgA,M ... « mineures » 0,1 - 1 g / L Plasminogène ... « traces » 0,1 g / L CRP, IgE ... IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Variable selon: Etat d ’hydratation En cas d’hémoconcentration: hyperprotidémie fonctionnelle deshydration extra-cellulaire En cas d’hémodilution: hypoprotidémie fonctionnelle hyperhydratation extra-cellulaire IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques HYPOPROTIDEMIES Peuvent atteindre 15 g/L portent surtout sur albumine et Ig Cliniquement: P.oncot insuffisante oedèmes (signe du godet) anomalies de la peau, phanères. IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques HYPOPROTIDEMIES Mécanismes physiopathologiques Diminution des apports carence d ’apports protéiques (dénutrition sévère) Malabsorption intestinale, insuff pancréatique défaut de synthèse: insuff hépatique fuite anormale: hémorragie massive au niveau cutané (exzéma exsudatif) rénal (s’accompagne d ’une protéinurie massive) tissulaire (brûlures, …) digestif (exzéma exsudatif) Catabolisme exagéré (processus tumoral) Augmentation des pertes IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques HYPERPROTIDEMIES Peuvent atteindre 120 g/L portent surtout sur les Ig, rarement sur l’albumine Mécanismes pysiopathologiques mis en jeu: (hémoconcentration) déshydratation Hyper gamma globulinémie (myélome) IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Prélèvement à jeun (pour limiter la lipémie préjudiciable au dosage) sérum (tube sec) plasma hépariné (dosage modéremment augmenté) Stable 1 semaine à + 4°C IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Méthodes de dosage Dosage difficile du fait de l ’hétérogénéité des protéines dosées 1) Mesure de l’indice de réfraction du sérum: En pratique: peu utilisé pour les protéines plasmatiques, réservé aux liquides de ponction (interférences +: bili, TG…) 2) Colorimétrie: Réaction du Biuret +++ En mil alcalin (NaOH), les liaisons peptidiques des protéines réagissent avec le sulfate de Cuivre Complexes rouge-violet Absorbance à 540nm IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Stabilité du sulfate de Cu: par le tartrate double de sodium et potassium. Iodure de potassium: empêche l’autoréduction des ions Cu2+ Différentes modalités de dosage: (1) Weichselbaum: C sulfate de Cu 12mmol/L NaOH 0,2M Sensibilité meilleure Moindre influence des substances interférentes Linéarité étendue (10-140g/l) mais réaction + lente Technique recommandée/ SFBC IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie (Différentes modalités de dosage) (2) Méthode Gornall sulfate de Cu 4-6mmol/L NaOH 0,5-0,8mmol/L La réaction est + rapide car milieu + alcalin mais moins sensible (ce qui est contourné par une bonne qualité des spectrophotomètres) Mesure en cinétique préférable à la mesure en point final: Les protéines ont des structures différentes et réagissent selon des cinétiques différentes Etalon internat. : Albumine bovine IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Interférences: Sérum lipémiques (troubles) Subst absorbant à 540nm (Hb, meds...) erreurs par excès Subst réagissant avec la technique du Biuret (carbamazépine, ATB..) erreurs par excès Blanc réactif (réactif alcalin sans le Cu) pour tous les sérums Blanc sérum (sérum sans réactif, ou avec NaOH mais sans sulfate de cuivre) IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Valeurs usuelles: Nné 46-74 g/L 1m-1a 51-73 1a-2a 56-75 enfant adulte alité 60-78 enfant adulte actif 65-80  Protéines plasmatiques: +2-4 g/L IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Variations physiologiques IFTAB Protéines plasmatiques Protidémie Variations physiologiques personne âgée: légère diminution grossesse diminution de 10% (hémodilution) exercice physique prolongé augmentation de 10% (hémolyse, inflammation, hémoconcentration…) IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques Analyse des protéines en fonction de leur charge électrique sur du SERUM (aspect du fibrinogène qui peut être confondu avec un pic monoclonal) intégration de l’intensité de la coloration de chaque bande par un densitomètre  analyse quantitative relative (%) ou absolue (à partir de la protidémie) IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques Différentes fractions séparées: Pré-albumine ALBUMINE GLOBULINES: 1 2 1 2  IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Principe de l’électrophorèse IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17

Electrophorèse des protéines sériques: les pièges Fibrinogène migre en  Hémoglobine migre en 2 Aspect de pics monoclonaux IFTAB Protéines plasmatiques 10-avr.-17