LIGNEE THROMBOCYTAIRE

I-INTRODUCTION 1. DEFINITION THROMBOPOIÈSE: production et la mise en circulation des plaquettes sanguine ou thrombocytes à partir des précurseurs medullaires: mégacaryocte Elle se localise au niveau de la moelle osseuse (MO )

I-INTRODUCTION 1. DEFINITION: Les mégacaryocytes sont les cellules nuclés les plus grandes ( 10 – 65 µm de diamétre), et les plus rares de la moelle osseuse.( 0,5 % ); Les plaquettes sont des cellules anucléés : Rôle important dans les phénomènes d’hémostase

I-INTRODUCTION 2. ASPECTS DE LA LIGNÉE: PROGENITEURS PRECURSEURS LIBERATION DES PLAQUETTES REGULATION EXPLORATION ET DESORDRES

II-Etape de différentiation de la lignée mégacaryocytaire les cellules de lignée mégacaryocytaire proviennent de la cellule souche pluripotente: CFU – S

II-Etape de différentiation de la lignée mégacaryocytaire La maturation des mégacaryocytes se fait par endomitose : dédoublement succéssif de l’ADN sans division cytoplasmique Formation des cellules géantes polyploïdes de 4 à 64 N Chromosomes avec un moyenne de 16 N.

II-Etape de différentiation de la lignée mégacaryocytaire Au cours de la maturation , on assiste à une lobulation et à une condensation progresse du noyau . Parallèlement à cette ploïdie, se fait la maturation du cytoplasme du mégacaryocyte qui:

II-Etape de différentiation de la lignée mégacaryocytaire - Augmentation de la taille - Passe de la basophilie à l’acidophilie - Formation des granules denses, granules alpha, lysosomes, système tubulaire dense - Apparition des GP de surface de la membrane GP IIb, GP IIIa - Synthèse de la PPO, à partir du stade de mégacaryocyte

III-PROGENITEURS 1. BFU-MK ( Burst forming unit Megakaryocyte) Génère en 21 jours de culture des colonies de plus 50 MK 80 % en phase G 0, Potentiel prolifératif important CD 34 +, HLA DR +

III-PROGENITEURS 2. CFU-MK ( Colony forming unit Megakaryocyte) Génère en 7 jours de culture des colonies de 4 à 32 MK Plus de 70 % en phase G 0, Potentiel prolifératif restreint CD 34 +, HLA DR + 10 à 20 / 10 5 cellules médullaires

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES sont: le promégacaryoblaste et les cellules morphologiquement reconnaissables

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES 1. Promégacaryoblaste: cellule non reconnu morphologiquement sur le myélogramme. 15 à 18 µm Rapport N/C élevé Noyau sphérique, nucléolé Perte quasi totale du pouvoir prolifératif Début de l’endomitose ( polyploidisation): 2 à 8 N CD 34 +, HLA DR+, peroxydase plaquettaire (PPO) + CD 41-, ( GP IIb/ IIIa) +- 20 à 30 / 10 5 cellules médullaires

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES 2. cellules reconnaisables morphologiquement . 4 stades de maturation nucléocytopasmique sans division: Mégacaryoblaste Mégacaryocyte basophile Mégacaryocyte granuleux Mégacaryocyte plaquettogène . 0,5 % des élements médullaires

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES . Marqueurs: PPO CD 41 CD 42 ( GP Ib) CD 36 ( GP IV)

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES a) Mégacaryoblaste: 20 % de la lignée Frottis médullaire :MGG; Microscopie optique 25 à 30 µm Rapport N/C élevé Noyau non segmenté Chromatine à trame grossière; 1 à 2 nucléoles Cytoplasme basophile Absence de granulations CD 34 -, HLA DR faible Mégacaryocyte de ploïdie variable: 2N à 64 N 2/3 à 16 N , ¼ à 32 N -Chacun de ces stades subira une maturation cytoplasmique

Aspect général : taille 25 à 30 µm forme irrégulière Noyau : taille : N/P >> 1 forme : ovalaire parfois déjà binucléé aspect de la chromatine : légère, nucléolée, grossière et filamenteuse  Cytoplasme : affinité basophile  sans granulations  Mégacaryoblaste

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES b) Mégacaryocyte basophile: 25 % de la lignée 30 à 40 µm Rapport N/C moins élevé Noyau non segmenté ou non Chromatine grossière; pas de nucléoles visible Cytoplasme plus abondant et moins basophile Granulations azurophiles ( futures granulations plaquettaires)

Mégacaryocyte basophile Aspect général : taille  50 µm forme irrégulière Noyau : taille : N/P > 1 forme : polynucléé (noyaux ovalaires)  aspect de la chromatine : moyennement condensée, grossière et filamenteuse Cytoplasme : affinité basophile rares granulations azurophiles près du noyau  Mégacaryocyte basophile

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES c) Mégacaryocyte granuleux: 55 % de la lignée 40 à 60 µm Rapport N/C faible Noyau polylobé Chromatine dense et irrégulière Cytoplasme acidophile nombreuses granulations azurophiles ; à localisation plus centrale. - Nombreuses membranes de démarcation délimitant les futures membranes plaquettaires avec les granules

Mégacaryocyte granuleux Aspect général : taille 50 à 80 µm forme irrégulière Noyau : taille : N/P inf à 1  forme : multinucléé  aspect de la chromatine : condensée en gros filaments Cytoplasme : affinité acidophile très nombreuses granulations dispersées Mégacaryocyte granuleux

IV-PRECURSEURS MEGACARYOCYTAIRES d) Mégacaryocyte plaquettogène: 5 % de la lignée 40 à 60 µm Noyau polylobé, picnotique Cytoplasme très acidophile avec processus de fragmentation ( émission des pseudopodes) Granulations azurophiles groupées en amas ( 10 à 12 / amas)

Mégacaryocyte thrombocytogéne Aspect général : taille  allant jusqu'à 100 ou 150 µm forme irrégulière Noyau : taille : N/P < 1  forme : multinucléée aspect de la chromatine : très condensée, picnotique  Cytoplasme : affinité acidophile clair cloisonnement des granulations formant les futures plaquettes (surtout en amas organisés à la périphérie de la cellule) Mégacaryocyte thrombocytogéne

e) Plaquettes: Eléments circulants Frottis coloré au MGG: MO Cellule anucléé , discoïde Zone centrale: Granulomère Zone périphérique: Hyalomère

Aspect général : taille 1 à 3 µm (plus grosses sur anticoagulant) forme irrégulière Cytoplasme : affinité basophile clair granulations nombreuses, moyennes, dispersées et azurophiles 

e) Plaquettes: Microscopie électronique 1 e) Plaquettes: Microscopie électronique 1. Membrane plaquettaire: - Phospholipide - GP membranaires: Rôle important dans l’hémostase: GP IB, GP IIb-IIIa, GP V

2. constituants internes: a)- Actomyosine b)- Microtibules et filaments c)- Système membranaires: SCO: Système caniculaire ouvert STD: Système tubulaire dense

d) les granules: *les granules denses: ATP, Adrénaline et sérotonine, Ca++ *Les granules alpha: Facteurs de la coagulation: Fibrinogène, V , VIII Facteurs spécifiques de la plaquette: PF3, PF4, TGF B, PDG F, Fact plaquettaire mitogène

*Les granules lysosomiaux: Très riche en enzyme: Hydrolase acide collagénase Phosphatase acide aryl sulfatase Protéase….

Microscopie Electronique Noyau : Maturation - Lobulation - Condensation de la chromatine - Augmentation de la ploïdie

Microscopie Electronique - RE - Appareil de Golgi - Apparition progressive des membranes de démarcation: Cytoplasme - Granules alpha et granules denses - lysosomes - Péroxysomes - GP membranaires: GP II b; GP III a

V- FORMATION DES PLAQUETTES 1. Site de libération des plaquettes: - Projections des pseudopodes mégacaryocytaires au travers de la monocouche endothéliale du sinus médullaire et libération des proplaquettes puis des plaquettes sous l’action des forces de cisaillement ( +++ ). - Fragmentation au niveau de la microcirculation pulmonaire ( 10 à 15 % ) - Rupture médullaire des mégacaryocytes.

V- FORMATION DES PLAQUETTES 2. Cinétique: La durée du transit médullaire entre mégacaryoblaste et PLT est de 8 à 12 jours ( Thymidine tritiée) 1 mégacaryocyte produit 2 000 à 3 000 Plaquettes leur durée est de 8 J ( Chrome 51, Indium 111) 30 % des PLT sont dans la rate.

V- FORMATION DES PLAQUETTES Deux propriétés majeurs des plaquettes: Adhésion et agrégation Hémostase Augmentation de la réaction inflammatoire Activation de complexes immuns Dissémination métastatiques

VI- RÉGULATION 1. Régulation positive: Thrombopoiètine: TPO Structure: Gène : 3q26-27, Protéine hydrophobe de PM: 35 – 38 Kd Protéine mature:(332aa) en 2 domaines: Domaine actif, homologie avec l’EPO Domaine glycosylé, indispensable à la sécrétion de la TPO

VI- RÉGULATION Synthèse: Foie +++, Cellules stromales, rein, muscles, testicules et cerveau Production : inversement proportionnelle à *la masse plaquettaire circulante et *la richesse mégacaryocytaire

VI- RÉGULATION TPO: Prolifération des progéniteurs mégacaryocytaires ( BFU-MK, CFU- MK) Croissance et différentiation des mégacaryocytes Augmentation de la production des plaquettes.

VI- RÉGULATION b) IL 3, IL 6, GM-CSF, EPO: Favorisent : la prolifération et la maturation des mégacaryocytes

VI- RÉGULATION 2. Régulation négative: TGFb1: Transforming growth factor: effet direct important sur les Progéniteurs MK PF4 : ( Chimiokine): effet inhibiteur des CFU-MK thrombine: effet inhibiteur sur la formation des proplaquettes. IFNa: rôle mineur Inhibent la prolifération et la maturation des progéniteurs MK Inhibent la maturation des mégacaryocytes

VI- RÉGULATION 3. Rôle du microenvironnement et des facteurs de transcription:

VII- EXPLORATION Numération des PLT: Manuelle ou sur un automate: toujours suivie d’un contrôle sur frottis sanguin pour éliminer les fausses thrombopénies Liée à la présence d’amas plaquettaire Au besoin refaire la numération sur tube citraté Élimine les fausses thrombopénies par agglutination des PLT in vitro.

VII- EXPLORATION 1. Hémogramme et morphologie a)Taux de PLT: 150 à 400 giga/l b) La coloration MGG permet d’apprecier: la morphologie (taille, et dégranulations des PLT) De contrôler les fausses thrombopénies c) thrombopénies induites par l’héparine d) Satellitisme plaquettaire (assez rare, 1/10 000),avec formation des « rosettes » plaquettaires autour d’un PNN, visible sur frottis.

VII- EXPLORATION 2. Myélogramme: Réalisé en cas de thrombopénie réelle L’étude cytologique de la moelle osseuse ( MO ) permet:

VII- EXPLORATION 1. Apprécier la richesse de la MO en MK: *Si MO riche: Thrombopénie périphérique *Si MO pauvre: Thrombopénie centrale ( aplasie ou envahissement) 2. Etude qualitative des mégacaryocytes pour apprécier leur maturation: - Présence ou non de mégacaryocytes thrombocytogéne

VII- EXPLORATION 3. Biopsie de la moelle osseuse: BOM Donne une estimation plus précise sur la présence d’amas MK. 4. Ultrastructure en microscopie électronique: - PPO - Granules - Membranes - Cytoplasme

VII- EXPLORATION 5. Etude in vitro des fonctions plaquettaires Rôle dans l’hémostase primaire: - Adhésion plaquettaire - changement de forme - Réaction de libération - Agrégation plaquettaire - Rétraction du caillot

VII- EXPLORATION b) Rôle dans la coagulation: Action procoagulante par le PF3 qui constitue le support phospholipidique: Activation des facteurs de la coagulation

VII- EXPLORATION c) Rôle dans la réaction inflammatoire: - Dégranulations des plaquettes en présence des : bactéries Complexes immuns virus - Libération de leur contenu granulaire d) Rôle majeur dans la thrombose artérielle et dans l’instalation de l’athérôme

VII- EXPLORATION 6. Recherche des Ac héparine- PF4 7. Culture des progéniteurs 8. Cytométrie en flux en hématologie moléculaire

VIII- Désordres Valeurs normales: 150 000 - 400 000 / MM 3 Toute diminution : Thrombopénie Toute augmentation: Thrombocytose