DE LA PHOSPHORYLATION DE VASP DANS LA SURVEILLANCE INTÉRÊT DE L’ÉTUDE DE LA PHOSPHORYLATION DE VASP DANS LA SURVEILLANCE DES TRAITEMENTS ANTIPLAQUETTAIRES Dominique HELLEY Service d ’Hématologie biologique Hôpital Européen Georges Pompidou - Paris Atelier de cytométrie en flux, GEHT Paris, le 9 Octobre 2003

(vasodilator-stimulated phosphoprotein) VASP (vasodilator-stimulated phosphoprotein) Appartient à la famille des protéines Ena/VASP Associées au cytosquelette et favorisant la polymérisation de l’actine Ubiquitaires, elles interviennent dans de nombreux domaines : - adhésion cellule-cellule et cellules-matrice - réorganisation endothéliale lors de l’angiogenèse - phagocytose - activation des lymphocytes T - guidage des axones - fermeture du tube neural - mouvements intra-cellulaires de Listeria monocytogenes… - et l’inhibition de l’activation plaquettaire

(vasodilator-stimulated phosphoprotein) EVH1 et 2 : Ena-VASP homology 1 et 2 PRO : Région riche en polyproline VASP (vasodilator-stimulated phosphoprotein) PRO EVH2 A B D C N EVH1 Liaison à la profiline, aux protéines à domaine SH3 et WW GP5 GP5 GP5 Liaison à G-actine Liaison à F-actine Liaison à VASP : Oligomérisation Liaison au motif FP4 de Zyxine, vinculine et ActA S153 T278 S239 PKA PKG

b a Actine-F Actine-F EVH1 PRO EVH2 profiline-actine Zyxine Vinculine Taline b a P Phosphorylation

VASP VASP-P GPIIbIIIa inactivée Plaquettes au repos Pas de liaison du fibrinogène PGE1 PGI2 Liaison du fibrinogène GPIIbIIIa activée Plaquettes activées ADP PKA AMPc Adénylate cyclase Protéine phosphatase VASP VASP-P

Mesure de la phosphorylation de VASP Hortsburg et al., 1994 : Phosphorylation de VASP est corrélée avec l’inhibition de l’activation plaquettaire de la liaison du Fg à la GPIIb-IIIa Mesure de la phosphorylation de VASP Utilisation d’un AC monoclonal de souris anti-VASP phosphorylée en S239 Geiger et al., 1999 : Clopidogrel inhibe les effets de l’ADP médiés par son récepteur P2Y12, sur la phosphorylation AMPc-dépendante de VASP. En revanche n’a pas d’effet sur la signalisation de l’épinéphrine, la thrombine et le thromboxane. Schwarz et al., 1999 : Utilisation de la CMF pour la mesure de la phosphorylation de VASP Intensité moyenne de fluorescence des plaquettes traitées par PGE1 Intensité moyenne de fluorescence des plaquettes traitées par PGE1 + ADP Ratio corrélé avec état de phosphorylation de VASP Expression du ratio comme % de réactivité plaquettaire inversement corrélé à l’efficacité du traitement par thiénopyridines Barragan et al., 2003 :

Barragan et al., Catheter Cardiovasc Interv, 2003;59:295-302 Réactivité plaquettaire 20 Témoins : 72,00 ± 4,17 % NS 16 patients traités par : - aspirine seule (250 mg/j) : 69,73 ± 5,62 % p < 0,05 p < 0,05 8 ticlopidine (250 mg x 2/j) 8 clopidogrel (75 mg x 2/j) - + thiénopyridines depuis 2 j 60,14 ± 9,60 % p < 0,05 - + thiénopyridines depuis 4,8 ± 1,3 j 48,37 ± 11,19 % Selon la réactivité plaquettaire < ou > 50% et le délai - bon répondeurs: réactivité plaquettaire < 50% obtenue en 48 h - répondeurs tardifs: réactivité plaquettaire < 50% en 3 à 7 j - mauvais répondeurs: réactivité plaquettaire >50% après 7 j

Barragan et al., Catheter Cardiovasc Interv, 2003;59:295-302 Suivi sur 30 jours de 1684 patients consécutifs pour pose de stent : 17 thromboses sur stent 16 Patients testés aspirine 250 mg/j + thiénopyridine (9 ticlopidine et 7 clopidogrel) depuis 7,6 ± 7,4 j [2-30 j] vs 30 patients aspirine + thiénopyridine ( 22 ticlopidine et 8 clopidogrel) depuis 4,4 ± 1,7 j [2-7 j] 16 Patients avec thrombose Réactivité plaquettaire (%) 10 20 30 40 50 60 70 80 30 Patients sans thrombose 63,28 39,80 p < 0,0001 Réactivité plaquettaire augmentée = facteur de risque ou conséquence de la thrombose coronaire aiguë ? Différence entre bons répondeurs et répondeurs tardifs ou mauvais répondeurs : Utilisation d’anti-GPIIb-IIIa ?