Acides nucléiques: structure propriétés physico-chimiques CHMI 2227F Biochimie I Acides nucléiques: structure propriétés physico-chimiques CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Acides nucléiques CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Hershey et Chase L’expérience du Waring blender… 32P seulement dans les acides nucléiques 35S dans les protéines seulement (Met/Cys) CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 1. bases azotées CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 2. sucres CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 3. nucléosides H Deoxyadenosine Lien glycosidique 1’ 9 1 Cytidine CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 3. nucléosides Purines Base DNA RNA Adénine Déoxyadénosine Adénosine Guanine Déoxyguanosine Guanosine Pyrimidines Base DNA RNA Cytosine Déoxycytidine Cytidine Thymine Déoxythymidine - Uracile Uridine CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 3. nucléosides CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 4. nucléotides Guanosine 5’monophosphate Déoxythymidine 5’triphosphate Alpha a Beta b Gamma g CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 4. nucléotides Nombre de groupes phosphates Déoxynucléotide/Nucléotide 1 Déoxyadenosine-5’-monophosphate 2 Déoxyguanosine-5’-diphosphate 3 Adénosine-5’-triphosphate CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 5. les polynucléotides CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 5. les polynucléotides http://www.mbi.ufl.edu/facilities/msg/bch4024m/lecture45.pdf a b g CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Nature des acides nucléiques 6. Les règles de Chargaff CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Structure des acides nucléiques 1. ADN bases Squelette sucre-phosphate CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Structure des acides nucléiques 1. ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D. 1 Å (Ångstrom) = 0.1 nm = 1 x 10-10 m

Structure des acides nucléiques 1. ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Structure des acides nucléiques 2. Duplex ARN/ARN et ADN/ARN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Structure des acides nucléiques 2. Duplex ARN/ARN et ADN/ARN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Structure des acides nucléiques Java applets: http://www.moleculesinmotion.com/ CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

ADN: Absorbance CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Dénaturation de l’ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Dénaturation de l’ADN DNA#1 DNA#2 Hyperchromicité CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Dénaturation de l’ADN G+C-rich A+T-rich CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Hybridation CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Électrophorèse en gel d’agarose + - Power ADN Microscopie électronique à balayage d’un gel d’agarose (1×1 µm)  • L’agarose est un polymère poreux qui permet le mouvement des molécules d’ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Électrophorèse en gel d’agarose Molécules d’ADN De longueur connue Courbe standard: Log longueur vs distance migrée Staining with ethidium bromide Le bromure d’éthidium fluoresce rouge seulement lorsqu’il s’intercale entre les paires de bases. Électrophorèse en gel d’agarose CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Analyse Southern et Northern Une sonde d’acide nucléique marquée au 32P n’est complé-mentaire qu’à une seule des molécules d’ADN présentes sur le gel Hybridation CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Analyse Southern ADN génomique coupé avec une enzyme de restriction Allèle différente des autres? CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

FISH Fluorescent in-situ hybridization CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Puces à ADN RNA labeling 1000’s of genes CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Dénaturation de l’ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Dénaturation de l’ADN CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Le paradoxe de la valeur C CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Le paradoxe de la valeur C Sauterelle Podisma pedestris Mouche à fruits Drosophila melanogaster 18,000 Mb 180 Mb kbp CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Le paradoxe de la valeur C Single copy Moderately repeated Highly repeated CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Le génome humain Génome humain 3000 Mb Gènes et autres séquences apparentées 900 Mb ADN extra-génique 2100 Mb ADN codant 90 Mb ADN non-codant 810 Mb ADN répété 420 Mb ADN à copies uniques/faible nombre de copies 1680 Mb Pseudogènes Fragments de gènes Introns, etc Répétitions en tandem Répétitions intercalées (« interspersed ») ADN satellite ADN minisatellite ADN microsatellite Éléments LTR Éléments SINE Éléments LINE Transposons CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.

Le génome humain CHMI 2227 - E.R. Gauthier, Ph.D.