Technique des hybridomes -Exercice 13- Vous disposez de trois types d'hématies : le type I possède les antigènes de surface A et B, le type II possède les antigènes de surface B et le type III ne contient aucun des deux antigènes ci-dessus. Des hybridomes ont été obtenus après immunisation d'une souris avec les hématies de type I. Décrire une procédure expérimentale permettant de sélectionner les hybridomes produisant des anticorps spécifiques de l'antigène de surface A. Type I M A B M B Type II M Type III Immunisation Dilution limite (0-1 cellule/puits) Technique des hybridomes Les hybridomes obtenus soit ne produiront pas d’Ac (cellulaires primaires autres que B immortalisées) ou des Ac non spécifiques de l’Ag (la souris utilisée n’est pas élevée en conditions stériles) et ne réagiront sur aucun type d’hématie: on les appelera « o/Acmx anti-AqH (Autre que « Hématies »), soit produisent des Acmx anti-A, des Acmx anti-B ou des Acmx anti-M. On cherche à sélectionner des hybridomes produisant les Acmx anti-A mais on ne peut pas faire un ELISA car on est en présence de cellules (n’adhèrent pas au plastique et ne vont pas bien dans du PBS-tween !) On va utiliser des tests basés sur l’Hémolyse pour faire notre sélection.

10 clones hémolyse 10 clones hémolyse 80 clones hémolyse 900 clones La question va reposer sur le nombre de tests que l’on devra faire et le choix de l’hématie (type I, II ou III) utilisé dans les tests successifs; sachant que pour faire une hémolyse, il faut des Acmx reconnaissant l’Ag, des hématies possédant l’Ag à leur surface, et du complément. On va donner des chiffres indicatifs de la représentation des différents clones sur 1000 clones issus de la dilution limite pour nous guider dans notre choix : Type I M A B Résultat Hémolyse contre type I : 1000 tests -Acm x A 10 clones hémolyse Type I M B Type II Hémolyse contre type II : 100 tests -Acm x B 10 clones hémolyse -Acm x M 80 clones hémolyse -O/Acm x AqH 900 clones Pas d’hémolyse -Acm x A 10 clones Pas d’hémolyse -Acm x B 10 clones hémolyse -Acm x M 80 clones hémolyse Les hybridomes produisant des Acmx anti-A sont ceux qui donnent une hémolyse contre le type I puis pas d’hémolyse contre le type II. On a la solution en 1100 tests, ce qui correspond à la stratégie la plus rapide et la moins couteuse en matériel, la meilleure solution donc, car on élimine d’emblée les 900 clones ne réagissant pas contre les hématies. Il en existe d’autres moins rapides et plus couteuses donc moins bonnes.

type I type II 10 clones Pas d’hémolyse 10 hémolyse 10 clones hémolyse Autres solutions moins bonnes qui ne seront donc pas choisies pour faire la sélection des hybridomes produisant les Acmx anti-A 910 tests 1000 tests Type I M A B Type I M B Type II type I type II 10 clones Pas d’hémolyse 10 -Acm x A hémolyse -Acm x B 10 clones hémolyse -Acm x M 80 clones hémolyse 900 -O/Acm x AqH 900 clones Pas d’hémolyse Pas d’hémolyse Ici les hybridomes produisant des Acmx anti-A sont ceux qui ne donnent pas d’hémolyse contre le type II puis hémolyse contre le type I. La solution est obtenue après 1910 tests. 1000 tests 920 tests 910 tests Type I M A B Type I M Type III Type I M B Type II type III type II type I 10 10 -Acm x A 10 clones Pas d’hémolyse Pas d’hémolyse hémolyse 10 10 clones Pas d’hémolyse -Acm x B hémolyse -Acm x M 80 clones hémolyse 900 900 -O/Acm x AqH 900 clones Pas d’hémolyse Pas d’hémolyse Pas d’hémolyse 2830 tests nécessaires Les hybridomes produisant des Acmx anti-A sont ceux qui ne donnent pas d’hémolyse contre le type III, pas d’hémolyse contre le type II puis hémolyse contre le type I. C’est la pire solution: elle nécessite 2830 tests.