Amplification du gène de l’Interleukine-6 et pronostic dans les glioblastomes A. Tchirkov1, T. Khalil1, E. Chautard1, K. Mokhtari2, L. Veronese1, B. Irthum1, P. Vago1, J.L. Kemeny1, P. Verrelle1 1 EA3846, Université d'Auvergne, Centre Jean Perrin / CHU, Clermont-Ferrand 2 Neuropathologie, Pitié-Salpétrière, Paris

Médiane de survie : inférieure à 1 an Glioblastome (GBM) Radiosensibilisation des tumeurs gliales : approche cellulaire et moléculaire. Médiane de survie : inférieure à 1 an Récidive à l’intérieur du volume irradié Optimisation de la radiothérapie Identification puis neutralisation de nouvelles cibles biologiques potentiellement impliquées dans la radiorésistance : la voie de l'Interleukine-6, le couple Télomère/Télomérase Irradiation (photons, neutrons) à faibles dose et débit de dose

Pourquoi l'Interleukine-6 ? Elle est secrétée par les cellules de glioblastome (Van Meir et al., 1990).

L’IL-6 : rôle dans la progression tumorale Perte de la fonction de présentation de l’antigène par les cellules dendritiques Immuno- suppression locale (Menetrier-Caux et al., 1998) Rein (Mizutami et al., 1995) Prostate (Borsellino et al., 1999) Myélome (Puthier et al., 1999) Pancréas (Yoshiharu et al., 2001) Col utérin (Wei et al., 2001) Angiogénèse VEGF Blocage de l’apoptose STAT3 AKT Mcl-1 (Cohen et al., 1996) Prolifération cellulaire MAPK GBM (Goswami et al., 1998) Mélanome (Lu et al., 1996) 7p15 28 aa 184 aa Séquences codant pour la protéine mature 5kb 27kDa

La voie de signalisation IL-6 gp80 gp130 gp130 p p Ras /MAPK prolifération cellulaire(MM) JAK/STAT PI-3K pAKT pSTAT3  Mcl1-L et BclXL Inhibition de l ’apoptose  VEGF

Expression de l ’IL-6 et grade de malignité dans les tumeurs gliales Ech 1 2 3 4 5 6 7 8 9 n=51 b2-micro 165 pb IL-6 120 pb glioblastomes P<0,001 Ech 1 2 3 4 5 6 7 8 9 b2-micro 165 pb n=28 IL-6 120 pb Autres gliomes Journal of Neurosurgery, 2001

Expression de l ’IL-6 et grade de malignité dans les tumeurs gliales GBM négatif b2-micro IL-6 HES RT-PCR IHC anticorps anti-IL6 b2-micro IL-6 GBM positif

L’IL-6 est-elle impliquée dans la radiorésistance des GBM ?

L'irradiation freine la prolifération de la lignée G5 mais n'a pas d'effet sur la fraction IL-6 positive. Ces résultats suggèrent un rôle potentiel de la fraction cellulaire IL-6 positive au sein de la lignée G5 dans la radiorésistance. Journal of Neuro-Oncology, 2002

La surexpression de l’IL-6 dans les GBM est-elle associée à une amplification du gène ?

Dosage du gène de l’IL-6 : PCR en temps réel (SYBRGreen I) 1 2 3 4 5 6 7 8 17 19 21 23 25 27 Fluorescence PCR cycle IL-6 ADN GBM5 63 207 ADN normal 12 184 Ratio 5,10 b-globin ADN GBM5/b-globin 12 933 ADN normal/b-globin 12 367 Ratio 1,05

Amplification du gène de l’IL-6 dans les glioblastomes British Journal of Cancer, 2001

Amplification du gène de l’IL-6 recherche par FISH sur coupes congelées dans 53 gliomes • Recherche négative dans les gliomes de grade II (9) et III (8) • Amplification retrouvée dans 40% des GBM, corrélée à l'expression

Amplification du gène de l’IL-6 Survie médiane : 6 mois vs 22 mois British Journal of Cancer, 2007

Perspectives 3 axes de recherche Confirmation des résultats sur une série plus importante Étude de l'amplicon incluant le gène de l'IL-6 (7p21) EGFR, Twist, … Étude des effets de la neutralisation de la voie IL-6 sur la radiosensibilité des GBM. Étude génomique et transcriptomique comparative de la population avec versus sans amplification du gène IL-6

EA 3846 – Université d’Auvergne Centre Jean Perrin – Clermont Ferrand Département d’Immunologie Centre Jean Perrin – Clermont Ferrand Jacques CHASSAGNE Pierre VERRELLE Andréï TCHIRKOV Toufic KHALIL Bernard IRTHUM Jean-Louis KEMENY Patrick MERLE Henri JANICOT Emmanuel CHAUTARD UMR CNRS 144 Institut Curie - Paris Laboratoire de Neuropathologie Pitié-alpétrière, Paris Charles DECRAENE Jean-Paul THIERY Karima Mokhtari