STÉRILISATION PAR LA CHALEUR HUMIDE mardi 5 janvier 2010 risques biologiques

1. principe Le problème de la stérilisation des liquides c’est que l’ÉBULLITION ne permet pas de stériliser : Un milieu bouilli va rapidement se troubler et présenter une culture microbienne, en général de bacilles Gram + Sont en cause des ……………………… mardi 5 janvier 2010

Les spores de Clostridium botulinum sont parmi les plus résistantes : 120°C quelques minutes Il faut donc chauffer le liquide à plus de 100°C : • ce n’est pas possible pour l’eau à la pression atmosphérique normale… • il faut donc augmenter la pression… en conservant une phase liquide : l’atmosphère saturée évitera l’évaporation de l’eau. mardi 5 janvier 2010

POURQUOI AUGMENTER LA PRESSION ? Pression en bars POURQUOI AUGMENTER LA PRESSION ? La température d’ébullition de l’eau dépend de la pression. Il faut donc chauffer l’eau sous pression (voir courbe). Dans une enceinte fermée, on obtiendra ainsi deux phases, une liquide et l’autre gazeuse pour l’eau (atmosphère saturée en eau empêchant l’évaporation du liquide). Ce n’est possible qu’avec l’AUTOCLAVE. La relation suit approximativement la loi suivante : P = (T/100)4 (p en bars, T en °C) ou p = 101,3 (T/100)4 en kPa Température en °C 1 bar = 1 atmosphère = 100 kPa = 105 Pa mardi 5 janvier 2010 risques biologiques

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La chaleur humide utilise donc l’AUTOCLAVE pour des barèmes pouvant être : 10 min à 134°C 15 min à 126°C 20 min à 121°C On ne peut pas stériliser de matériaux thermosensibles (polyéthylène…) mais les ……………………… peuvent l’être car la pression de vapeur est saturante et il ne peut donc y avoir d’évaporation. Comparativement à la chaleur sèche, les barèmes utilisés pour la chaleur humide montrent clairement une moindre durée pour une température plus faible. L’efficacité du procédé sur les …………… est donc liée à l’eau. manomètre Soupape de sécurité Cuve Panier Robinet arrivée d’eau Eau Robinet de vidange Chauffage mardi 5 janvier 2010 risques biologiques

Les étapes peuvent être : Dans une stérilisation par chaleur humide les paramètres qui interviennent sont : Le ……………………………… (indissociable d’où un manomètre indiquant la température), La ……………………………, L’hygrométrie. Les étapes peuvent être : …………………………… assurant le chauffage de l’enceinte et des parois, la …………………………………… chassé par l’eau qui bout, la ………………………………………………………, seul gaz présent dans l’enceinte, la ………………………… qui commence puis dure en fonction des contraintes du barème choisi. (en réalité, on tient compte de l’ensemble de la phase de chauffage par des formules complexes)‏ éventuellement une …………………………………… avec évacuation de la vapeur d’eau, le ………………………………………… permettant le refroidissement et l’ouverture de l’autoclave. L’autoclave doit être contrôlé et n’est manipulé que par du personnel habilité. mardi 5 janvier 2010 risques biologiques

2. Mise en oeuvre Les matériels ou produits stérilisés sont conditionnés car ils doivent rester stériles après le passage à l’autoclave. Les ………………… sont emballés dans un papier crêpé non tissé dont les fibres se resserrent au séchage et qui devient ainsi imperméable aux microorganismes. Le ……………………………… est placé dans des poches thermorésistantes et thermoscellées (ou fermées par un autre moyen). Le …………………………… doit être placé dans des conteneurs équipé d’un système assurant le passage de la vapeur (soupapes). Les …………………………… sont conditionnés dans des tubes ou flacons fermés, mais légèrement dévissés pour assurer l’entrée de la vapeur. Ils doivent être fermés complètement en sortie. mardi 5 janvier 2010 risques biologiques

3. Contrôles du fonctionnement Selon les procédures de fonctionnement, un test de fonctionnement est réalisé par exemple chaque matin. Un enregistrement des données de chaque cycle est réalisé permettant de retrouver, pour chaque lot, l’opération réalisé soit par ex : cycle textile à 134°C durant 10 min cycle instruments à 134°C durant 18 min assurant la destruction des prions, cycle caoutchouc à 121-125°C durant 20 min Un indicateur visuel, sous forme de ruban adhésif thermosensible, permet de vérifier le passage effectif dans l’autoclave (sans pouvoir préciser le cycle réel). Il existe aussi des intégrateurs colorés qui prennent en compte tous les paramètres du cycle. mardi 5 janvier 2010 risques biologiques