La biotechnologie SNC4U

Amplification de l’ADN Production d’un grand échantillon d’une séquence d’ADN cible à partir d’un seul fragment d’ADN.

Réaction en chaine de la polymérase (PCR) Amplification automatisée de l’ADN.

PCR Voir fig 9.13 pour prendre en note les étapes... On place l’ADN à répliquer dans une solution qui contient des amorces et des nucléotides et de la polymérase thermorésistante. On chauffe pour diviser le double brin d’ADN. Des amorces d’environ 20 nucléotides se fixent à l’extrémité 3’ des brins d’ADN à répliquer (de chaque côté de la séquence cible). La polymérase fait la réplication. La réplication terminée, le cycle recommence. Durée : une minute.

PCR Pourquoi utiliser de la polymérase thermorésistante? On ne veut pas qu’elle soit dénaturée à l’étape ou l’on chauffe ADN. Si elle n’était pas thermorésistante, il faudrait ajouter de l’enzyme à chaque cycle.

Électrophorèse en gel (1/3) Sépare les molécules d’ADN en fonction de leur masse et de leur charge électrique.

Électrophorèse en gel (2/3)

Électrophorèse en gel (3/3) Mettre la solution d’ADN dans les puits à l’extrémité du gel Soumettre le gel à un courant électrique pour faire migrer l’ADN vers le pôle positif. (ADN = acide = négatif) Les fragments d’ADN se séparent en bandes pour former une empreinte génétique.

empreinte génétique

Analyse de l’ADN On peut amplifier un échantillon d’ADN retrouvé sur une scène de crime à l’aide du PCR

Analyse de l’ADN L’ADN amplifié est étalé sur un gel d’électrophorèse pour comparer le motif des bandes avec l’empreinte génétique des personnes suspectes.

Lien de parenté La moitié de l’ADN d’un enfant provient de son père et l’autre moitié de son père. À l’aide des empreintes génétiques, on peut déterminer les liens de filiation

Séquençage de l’ADN Déterminer la séquence des base azoté dans le brin d’ADN

Cible et isole un segment d’ADN à séquencer Cible et isole un segment d’ADN à séquencer. On mets ADN dans 4 milieux réactifs différents. Dans ce milieu identifié C il y a un petit pourcentage de nucléotide C modifié intentionnellement (didesoxynucléotide- qui manque un ocygène). Ceci cause que la synthèse du brin d’ADN est parfois arrêté. Sur le gel on aura des bandes de grandeurs différents.

Séquençage de l’ADN Didésoxynucléotides : nucléotide auquel il maque un oxygène = arrêt de l’élongation Il existe un didésoxynucléotide pour chaque base azoté (A, T, C et G) On ajoute des dd-A à la préparation du séquençage, cela va nous indiquer tous les endroits où il y a des ADÉNINE dans la séquence. On fait la même chose pour dd-T, dd-C et dd-G Voir p. 298 pour schéma détaillé. Exercice 8 p. 302

Pourquoi il y a des brins de différentes longueurs dans quand on a mis seulement une sorte de nucléotide? Amorce TTGT Brin 3’ AACAGCTAGAGTCACTAGT5’

Henrietta Lacks

http://www.lefigaro.fr/sciences/2011/01/08/01008- 20110108ARTFIG00001-hela-l-incroyable-destin- d-une-immortelle.php