Dans la vie d’un biologiste Biologie moléculaire Dans la vie d’un biologiste

Cas clinique hépatite C Mr X , 47 ans,effectue bilan préopératoire Le bilan biologique montre: NFS normale ALAT , ASAT: 2 x la normale AgHBs – Anti-HBs:+ Sérologie hépatite C positive

Examens complémentaires à pratiquer ARN Génotypage Sérotypage viral Charge virale hépatite C Électrophorèse des protéines Bêta 2 microglobuline Bilirubine

Examens complémentaires ARN: Témoin de la réplication: 20% hep C sont ARN négatif Plus sensible que la charge virale: Amplicor: 50UI CV amplicor: 600 à 850 000UI bDNA: 615 à 7 700 000 UI Mais PCR en temps réel sensibilité: 15UI

Examens complémentaires Sérotypage ou génotypage: idem , indispensable pour mise sous traitement Sérotypage ne donne pas sous type (1,2….) Mais pas d’influence sur le traitement Génotypage est plus précis Traitement et suivi sont conditionnés par le génotype

Examens complémentaires à pratiquer Charge virale hépatite C ARN Génotypage Sérotypage viral Électrophorèse des protéines Bêta 2 microglobuline Bilirubine

Génotypage se fait par: Séquençage région NS3 Séquençage région NS5 INNO LIPA PCR en temps réel

Génotypage Région 5’ NC le plus fréquent , quelquefois pas sous-typage NS5: plus de variabilité INNO LIPA: Bonne technique, facile PCR en temps réel: avenir!!!!!!!!!

Génotypage se fait: Séquençage NS3 Séquençage NS5 INNO LIPA PCR en temps réel

Décision médicale: Mise sous traitement

Avant traitement Charge virale Détection de mutations de résistance au traitement par séquençage

Avant traitement Charge virale: Recherche de mutations de résistance: Indiquée pour génotypes 1,4,5 Pas nécessaire pour génotypes 2 et 3 Recherche de mutations de résistance: - Pas de nouvelles molécules : antiprotéases???

Avant traitement Charge virale Détection de mutations de résistance au traitement par séquençage

Suivi pendant traitement ARN mensuel Charge virale hebdomadaire Transaminases hebdomadaires ARN à M6 NFS mensuelle Hormones thyroïdiennes

Suivi pendant traitement Génotype 1: charge virale à S12 (consensus 2002) ou à S4 (2006) Génotypes 2 et 3: ARN à M6 Transaminases tous les mois NFS tous les mois Hormones thyroïdiennes: TSH tous les 3 mois

Suivi pendant traitement ARN mensuel Charge virale hebdomadaire Transaminases hebdomadaires ARN à M6 NFS mensuelle Hormones thyroïdiennes

Suivi post traitement ARN mensuel Charge virale bi-annuelle ARN à M6 puis 1 an Génotypage Séquençage pour mutations de résistance

Suivi post traitement ARN mensuel Charge virale bi-annuelle ARN à M6 puis 1 an Génotypage Séquençage pour mutations de résistance

Hépatite B Mr C , origine asiatique , arrivé en France depuis 6 mois consulte en gastro-entérologie HAV totaux pos HAV IgM: neg Ag HBs pos Anti-HBc pos avec IgM neg Ag HBe neg Anti-HBe pos Hépatite C neg

Examens complémentaires à demander ADN B Sérologie hépatite delta ADN delta Génotypage Hépatite B Anti-HBs

Examens complémentaires à demander ADN B : indispensable Facteur de gravité : hépatite delta 5% AgHBs sont infectés par delta Virus delta: pas de technique commerciale mais techniques de RT-PCR maison et maintenant PCR en temps réel Génotypage ???

Examens complémentaires à demander ADN B Sérologie hépatite delta ADN delta Génotypage Hépatite B Anti-HBs

ADN B bDNA PCR classique PCR en temps réel TMA bDNA détecte 25 UI/L

Techniques ADN b bDNA Amplicor PCR temps réel linéarité : 615 à 7,7 millions UI/ml Amplicor Linéarité: fonction de la dilution (galère!!!!!!!!) Sensibilité: 200UI/ml PCR temps réel Linéarité : 54 - 110 millions UI/ml 12 – 50 millions UI/ml Sensibilité : 12 UI/ml soit 70 copies/ml

ADN B bDNA PCR classique PCR en temps réel TMA bDNA détecte 25 ui

Décision thérapeutique Patient est mis sous Lamivudine avec une charge virale à 8800 UI/ml

Suivi Médical sous traitement ADN B mensuel NFS hebdomadaire Charge virale hépatite delta AgHBs mensuel

Suivi Médical sous traitement ADN B trimestriel ALAT trimestrielle Si négativation de l’ADN, faire un AgHbS La négativation de l’ag HBs est rare sous lamivudine , 5 à 10% sous interféron

Suivi Médical sous traitement ADN B mensuel NFS hebdomadaire Charge virale hépatite delta AgHBs mensuel

Au bout de 6 mois , la charge virale par bDNA est < 350UI/ml Après 2 ans de traitement , la charge virale est de 10000 UI/ml

Quels examens doit on pratiquer? Génotypage Charge virale hépatite delta Ag Hbe Recherche mutant C/préC Recherche mutation YMDD

Traitements Interféron + peg –interféron Analogues nucléosidiques: Lamivudine :3TC Emtricitabine: Emtriva Adefovir: Hepsera Tenofovir: Viread clevudine entecavir

Incidence des résistances Lamivudine: 24% en 1 an 70% en 4 ans Adefovir 15% en 4 ans ceci en monothérapie Intérêt des bi ou trithérapies????

Incidence des résistances mutation YMDD : la + fréquente , mutation de résistance à la lamivudine, emtricitabine Pas de résistance croisée entre les différents nucléosidiques et nucléotidiques

spacer Pol/RT RNaseH 1 183 349 (rt1) 692 (rt344) 845 a.a. I(G) II(F) A Terminal protein spacer Pol/RT RNaseH 1 183 349 (rt1) 692 (rt344) 845 a.a. GVGLSPFLLA YMDD I(G) II(F) A B C D E L180M LAM L801 M204V/I/S V173L ADV A181V N236T I169T ETV M250V S184G M202I LdT M204I TDF V1911I A194T

Quels examens doit on pratiquer Génotypage Charge virale hépatite delta Ag HBe Recherche mutant C/préC Recherche mutation YMDD

Recherche de résistance à la Lamivudine Séquençage Hybridation moléculaire PCR en temps réel Phénotypage antivirogramme

Recherche de résistance à Lamivudine Séquençage Hybridation moléculaire PCR en temps réel Phénotypage antivirogramme