Intérêt de la FISH dans le diagnostic différentiel des tumeurs solides André MAUES DE PAULA ATC 2015 Strasbourg

Tumeur solide Masse tissulaire qui « habituellement » ne contient pas de kystes ou des zones liquides Mais plutôt: Masse tissulaire dont l’histogénèse concerne des cellules non circulantes

Tumeurs Hématologiques Tumeurs solides Tumeurs Hématologiques Sarcomes Adénomes Carcinomes Gliomes Etc.. Leucémies Lymphomes

Sarcomes Tumeurs malignes d’origine mésenchymateuse Rares <1% des tumeurs solides des adultes Diversité morphologique (« plusieurs types histologiques ») Problème diagnostique

Sarcomes selon l’OMS Tumeurs vasculaires: Angiosarcome, hémangioendothéliome épithélioïde Tumeurs fibroblastiques: Fibrosarcome, myxofibrosarcome, sarcome fibromyxoïde de bas grade Tumeurs cartilagineuses et/ou ostéoformatrices: Chondrosarcome mésenchymateux ou myxoïde, ostéosarcome extra-squelettique

Sarcomes selon l’OMS Tumeurs adipeuses: Liposarcome bien différencié/ liposarcome dédifférencié, liposarcome myxoïde/ à cellules rondes, liposarcome Tumeurs musculaires lisses ou striées: Léïomyosarcome/ rhabdomyosarcome Tumeurs dont la différenciation est incertaine: Pléiomorphe /indifférencié (HFM) Synovialosarcome, sarcome épithélioïde, sarcome alvéolaire, sarcome à cellules claires

Sarcomes Hétérogénéité x Comportement biologique: Agressivité x Potentiel Métastatique Certains avec un aspect phénotypique bien défini D’autres inclassables Les tumeurs bénignes sont plus fréquentes et miment des sarcomes

Sarcomes Diagnostic Macroscopie Imagerie Microscopie

Sarcomes Diagnostic Macroscopie Imagerie Microscopie IHC

Sarcomes Interprétation Immunohistochimique (IHC) parfois équivoque: Marquage non spécifique Marquage des cellules non tumorales Importante discordance 25% 16% avec un impact sur le traitement

Sarcomes Diagnostic Macroscopie Imagerie Microscopie IHC Profil Moléculaire

Sarcomes Sarcomes à caryotype simple avec une translocation ou une amplification bien définie Sarcome à caryotype simple ou complexe avec une mutation ponctuelle spécifique Sarcome à caryotype complexe avec des remaniements chromosomiques multiples, duplications, délétions…

Sarcomes à caryotype simple avec translocation ou amplification Outils diagnostiques complémentaires Caryotype de la tumeur Hybridation in situ PCR RT-PCR, Q-PCR CGH/ CGH array NGS (Next Generation Sequencing)

Hybridation in situ par fluorescence (FISH) Avantages Sur des noyaux métaphasiques ou inter phasiques Culture cellulaire Matériel congelé Préparations cytologiques: Appositions ou étalements Matériel fixé en formol et inclus en paraffine Permet de distinguer histologiquement les zones tumorales des zones de tissu sain Plus rapide que les autres méthodes

FISH - Principes

FISH - Sondes Sondes de Fission (« Break appart ») Sondes de Fusion Normal Pathologique Sondes de Fission (« Break appart ») Sondes de Fusion Locus/Centromeriques spécifiques

Le choix de la sonde… Type histologique Remaniement moléculaire Ewing/PNET t(11;22)(q14;q12) EWSR1-FLI1 t(21;22)(q22;q12) EWSR1-ERG t(7;22)(p22;q12) EWSR1-ETV1 t(17;22)(q12;q12) EWSR1-E1AF t(2;12)(q33;q12) EWSR1-FEV RMS alvéolaire t(2;13)(q35;q14) PAX3-FKHR t(1;13)(p36;q14) PAX7-FKHR Synovialosarcome t(X;18)(p11.23;q11) SYT-SSX1 t(X;18)(p11.21;q11) SYT-SSX2 T à petites cel. Rondes desmo t(11;22)(p13;q12) EWSR1-WT1 S à cellules claires t(12;22)(q13;q12) EWSR1-ATF1 Liposarc bien diff et dédiff amplification de 12q13-15 (MDM2, CDK4) Liposarcome myxoïde et t(12;16)(q13;p11) (FUS-CHOP) à cellules rondes t(12;22)(q13;q11-12) (EWSR1-CHOP) ETC…….

FISH - Objectifs Confirmer ou infirmer une hypothèse diagnostique Faire le diagnostic différenciel entre deux (ou plusieurs) entités morphologiquement similaires Fournir des informations complémentaires pour évaluer le pronostic

Lipome ou Liposarcome?

MDM2 CEP12 LIPOSARCOMA BIEN DIFF

MDM2 CEP12 LIPOSARCOMA DEDIFF

MDM2 CEP12 LIPOSARCOMA DEDIFF

Sarcome de Ewing ou Lymphome?

EWSR1 SARCOME DE EWING

Diagnostic ?

DDIT3 LIPOSARCOME MYXOIDE

Diagnostic ??

SS18 SYNOVIALOSARCOME

Osteosarcome ou kyste anévrysmal ?

USP6 KYSTE ANEVRYSMAL (Tumeur bénigne) Et il existe une variante « solide »

FISH – Inconvénients Hybridation inadéquate sur matériel décalcifié Optimisation du déparaffinage Optimisation de l’intensité du signal Certains noyaux sur coupes d’un matériel congelé ou inclus en paraffine ne comportent pas l’ensemble du matériel génétique Superposition des noyaux tumoraux Les altérations de la ploïdie peuvent gêner l’interprétation

FISH – Conclusion Peut être réalisé même sur un matériel fixé en formol et inclus en paraffine Un examen qui peut être rapide 24 à 72h Permet de distinguer le tissu sain du tissu tumoral Confirme ou infirme une hypothèse diagnostique et permet de faire la différence entre entités histologiquement similaires Fournit des éléments complémentaires pour le pronostic et la prise en charge thérapeutique

Andre.MauesDePaula@ap-hm.fr Service d’Anatomie Pathologique et de Neuropathologie CHU La Timone UMR910 Génétique médicale et génomique fonctionnelle Equipe Myologie Translationnelle  Faculté de Médecine - Timone 4eme étage - aile verte ATC 2015 Strasbourg