PRESENTATION DE CAS Lymphomes B de haut grade avec réarrangement des loci de MYC et BCL2 et/ou BCL6 appelés « double ou triple hit » Expérience du laboratoire.

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1 PRESENTATION DE CAS Lymphomes B de haut grade avec réarrangement des loci de MYC et BCL2 et/ou BCL6 appelés « double ou triple hit » Expérience du laboratoire CERBA Se présenter

2 INTRODUCTION Les lymphomes diffus à grandes cellules B (DLBCL) représentent la variété la plus fréquente des lymphomes de l’adulte (environ 40% des LNH) Définition selon critères histopathologiques : Architecture diffuse de la population tumorale Grande taille des cellules tumorales de phénotype lymphoïde B mature Comporte de nombreuses entités dont certaines ont été supprimées, modifiées ou renommées dans la classification révisée par l’OMS 2016 DLBCL = Diffuse Large B cell Lymphoma

3 EVOLUTION DE LA CLASSIFATION oms
2008

4 NOUVELLE CLASSIFICATION
Suppression du « lymphome à grandes cellules B inclassable et de forme intermédiaire avec un lymphome de Burkitt » Création de deux nouvelles entités : Lymphomes B de haut grade avec réarrangement des loci de MYC et BCL2 et/ou BCL6 appelés « double ou triple hit » Très mauvais pronostic, ne répondant pas au traitement classique Lymphomes B de haut grade, ne présentant pas de réarrangement de MYC, BCL2 et/ou BCL6 Les 2 entités de lymphome de haut grade se différencient par la présence ou non des réarrangements myc/bcl2/bcl6. Lymphome agressif B à grandes cellules : Myc remanié avec bcl2 ou Bcl6 remanié : Double hit Myc remanié avec BL2 et Bcl6 remanié : triple hit Au laboratoire caryotype et ces 3 remaniements en systématique.

5 Sonde MYC (8q24) BA Remaniement quand dissociation d’un signal jaune
Pour rappel Remaniement quand dissociation d’un signal jaune

6 SONDE IGH/BCL2, double couleur, double fusion
Signal résiduel sur les chrs normaux Ds les cas t(14;18) mais il peut exister d’autres partenaires aavec le réarrangement BCL2: utilisation de la sonde Bcl2 BA. Remaniement quand présence de 2 signaux de fusion jaunes sur les dérivés chromosomiques, d’un signal rouge et d’un signal vert sur les chromosomes 14 et 18 normaux

7 SONDE BCL6 (3q27) BA Remaniement quand dissociation d’un signal jaune

8 CAS n° 1 Femme de 60 ans Clinique :
Masse au niveau du mésentère et du péritoine Infiltration rénale droite Lésion ostéolytique iliaque gauche Prélèvement médullaire envoyé au laboratoire pour caryotype onco-hématologique dans le cadre du bilan d’extension N.B : Prélèvement pauvre avec indication suspicion LNH sans critère de gravité Culture prioritaire 72HDI Multiples masses au niveau digestif, rénal et osseux.

9 CULTURE MEDULLAIRE 72H AVEC MITOGENES B (DSP30-IL2)
11 des 15 mitoses analysées présentent un caryotype très complexe et hyperdiploïde (nombre modal à 49 chromosomes) avec anomalies chromosomiques clonales de nombre et de structure dont le remaniement du bras long d'un chromosome 8 et la translocation t(14;18) impliquant le bras long d'un chromosome 14 en q32 et le bras long d'un chromosome 18 en q21.

10 RESULTAT FISH SONDE MYC (8q24)
der(8) der(?) der(?)

11 RESULTAT FISH SONDE IGH/BCL2
der(18) der(14) Bcl 6 aussi testé : pas de remaniement malgré un doute au K Ces résultats associés aux données histopathologiques confirment le diag de lymphome B diffus à gdes cell et permettent de poser le diag de lymphome B de haut grade double hit myc/Bcl2. der(18) 18 n 14 n

12 Cas n°2 Homme de 65 ans Clinique :
Lésion cutanée pré-sternale Frottis de l’aspiration de la lésion cutanée : cellules d’allure pseudo-blastique faisant suspecter le diagnostic de leucémie aiguë Prélèvement médullaire envoyé au laboratoire pour caryotype onco-hématologique

13 CARYOTYPE MEDULLAIRE SUR CULTURE 24H
Toutes les mitoses analysées présentent un caryotype très complexe et hyperdiploïde (nombre modal à 47 chromosomes) avec anomalies chromosomiques clonales de nombre et de structure très complexes dont la translocation t(8;14) entre le bras long d'un chromosome 8 en q24 et le bras long d'un chromosome 14 en q32, le dérivé d'un chromosome 18 par probable translocation t(14;18).

14 RESULTAT FISH SONDE MYC (8q24)
Confirme t(8;14) du K 8 n der(8) der(14)

15 RESULTAT FISH SONDE IGH/BCL2
der(18) der(?) BCL 6 Normal. IHC confirme à postériori le diagnostic de lymphome B diffus à grandes cellules ainsi que les données du myélogramme et de l’immunophénotypage. Lymphome de haut grade Double hit myc/Bcl2. Myélogramme et immunophénotypage der(?) ider18q 14 n

16 Cas n°3 Homme de 88 ans Mise en culture d’une biopsie ganglionnaire sans précision sur le type de LNH suspecté

17 CULTURE DE BIOPSIE GANGLIONNAIRE 72H AVEC MITOGENES B
11 des 16 mitoses analysées présentent un caryotype très complexe et hyperdiploïde (nombre modal à 47 chromosomes)avec anomalies chromosomiques clonales de nombre et de structure dont le remaniement du bras long d'un chromosome 3 par translocation t(3;14) et translocation t(3;18), le remaniement du bras long d'un chromosome 8 par translocation t(8;14) et translocation t(3;8), le remaniement du bras long d'un chromosome 14 par translocation t(8;14), le remaniement du bras long d'un chromosome 18 par translocation t(14;18).

18 RESULTAT FISH SONDE MYC (8q24)
der(14) der(8)

19 RESULTAT FISH SONDE IGH/BCL2
der(18) der(?) 18 n der(3)

20 RESULTAT FISH SONDE BCL6 (3q27)
der(8) IHC sur biopsie ganglionnaire confirme le diagnostic de lymphome B diffus à grandes cellules Haut grade Triple hit Myc/bcl2/bcl6 der(3)

21 LYMPHOMES MALINS Regroupe des entités très hétérogènes
La classification OMS 2016 des hémopathies lymphoïdes matures reflète l’importance d’un diagnostic pluridisciplinaire avec confrontation des données: Cliniques, Morphologiques, Immunologiques, Génétiques chromosomiques et moléculaires Intégration des données cytogénétiques tant pour le diagnostic de clonalité que pour le diagnostic différentiel entre ces entités Impact pronostique de certaines anomalies ou de la complexité du génome Les 3 cas présentés reflètent bien la gde hétérogénéité du gpe des lymphomes.

22 CYTOGENETIQUE DES LNH Analyse cytogénétique fortement recommandée dans la prise en charge des lymphomes voire indispensable dans certaines indications Atout majeur pour la distinction LNH de Burkitt et lymphome B à grandes cellules Tout tissu ou liquide biologique tumoral peut faire l’objet d’un caryotype Adaptation des conditions de culture cellulaire en fonction du sous-type de lymphome suspecté (ou connu) FISH métaphasique et/ou interphasique constitue également une approche robuste et rapide, facilitée par le nombre important de réarrangements récurrents caractéristiques, voire spécifiques de ces entités. Myc,bcl2 et bcl6

23 CONDITIONS ET DUREES DE CULTURE DES LNH Recommandations GFCH 2016
Hémopathie suspectée Ganglion, rate ou toute biopsie tissulaire : durée et condition de culture optimales Moelle osseuse ou sang ou autre liquide biologique : durée et condition de culture optimales Lymphome (sans autre indication) Culture courte (17-24h) sans mitogènes + culture longue (72h) avec mitogènes B (ODN + IL2) LNH de Burkitt Culture courte indispensable (4-17H) sans mitogènes Suspicion de transformation d’un lymphome B à petites cellules connu, DLBCL Si possible, seconde culture longue (72h) avec mitogènes B (ODN + IL-2) Antécédent ou suspicion de lymphome de type lymphocytique (ou LLC), manteau, marginal, ou Waldenström ou autre SLP connu Culture longue (72h) avec mitogènes B (ODN + IL-2) Une seconde culture de 24h sans mitogènes possible Mitogènes B (ODN + IL-2) Lymphome T Culture courte (17-24h) sans mitogènes et/ou culture longue (72h) avec mitogènes T (Phytohémagglutinine - PHA)

24 Conclusion Approche pluridisciplinaire et complémentaire dans le diagnostic de LNH Place importante de la cytogénétique devenue incontournable dans le diagnostic des LNH agressifs face à la variété des présentations cliniques et biologiques