IDENTIFICATION DES COCCI GRAM+

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2 IDENTIFICATION DES COCCI GRAM+

3 LES COCCI A GRAM+

4 TAXONOMIE ET CLASSIFICATION
Les staphylocoques appartiennent à la famille des micrococcaceae qui comprend quatre genres qui diffèrent par la composition en base de leur ADN G+ C (mol %) - Micrococcus - Staphylococcus Stomatococcus Planococcus

5 Cocci Gram positif en amas ou diplocoques
LES STAPHYLOCOQUES Cocci Gram positif en amas ou diplocoques Aérobie, cultive facilement  colonies blanches ou pigmentées en jaune Genre Staphylococcus : 43 espèces Staphylocoque coagulase positif : S. aureus Staphylocoque coagulase Négatif : nombreuses espèces

6 Staphylocoque coagulase positif : = Staphylococcus aureus
Facilement identifiable par des kits d’agglutination (CF, Proteine A,..) Virulence +++ Sécrétion d ’enzymes (Coagulase libre, liée, DNAse), et de Toxines (entérotoxines, PVL) responsable d’infections communautaires ou nosocomiales

7 Staphylocoque coagulase négatif : = nombreuses espèces
(S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. capitis,…) Beaucoup moins virulent, responsable d’infections nosocomiales Identification biochimique si rôle possible dans une infection

8 CARACTERES DIFFÉRENTIELS DES PRINCIPALES ESPECES
Définition du genre Staphylococcus Coques à Gram positif de taille moyenne, en amas Non exigeants Catalase + AAF Fermentatifs du glucose et du fructose CARACTERES DIFFÉRENTIELS DES PRINCIPALES ESPECES  de Staphylococcus 

9 A : aéro-anaérobie facultative B : aérobie strict C : micro-aérophiles
Type respiratoire (étude avec O2 de l’air) Test : On utilise une gélose VF liquide : on ensemence en spiral avec une pipette pasteur et on refroidit à l’eau froide (puis incuber à 37°C 24h) Résultats : A : aéro-anaérobie facultative B : aérobie strict C : micro-aérophiles D : anaérobie strict AAF

10 2- Etude des enzymes respiratoires : catalase +oxydase
Technique de la recherche du Catalase 2 H2O O H2O Catalase - S’il y a effervescence  Cat + - S’il y a absence d’effervescence  Cat - 10

11 II- Etude du métabolisme glucidique: Voies d’attaques des Glucides
Etude effectué sur milieu Hugh et Leifson : milieu semi liquide contenant un indicateur de PH : le Bleu de bromothymol ou le rouge de phénol. -Les bactéries peuvent utilisées le Glucose selon 2 voies: Voie Fermentative : la Réaction se déroulent en absence d’oxygène provoquant une baisse de pH du milieu suite à la formation d’acide Voie Oxydative: l’oxygène de l’air est obligatoirement utilisé , donc il y a peu d’acide formé et l’acidification aura lieu uniquement à la surface 11

12 - Technique  Germe inactif vis à vis du Glucose
Aucun virage dans les 2 tubes  Germe inactif vis à vis du Glucose Le milieu reste tel qu’il était avant ensemencement. Il n’y a pas de culture. Les bactéries sont inertes vis-à-vis du glucose - Technique Virage au jaune débutant dans le tube ouvert Virage de l’indicateur de pH au jaune dans la partie supérieure du tube. Le milieu est devenu acide. Il y a utilisation du glucose par les bactéries en présence d’ O2. Les bactéries sont oxydatives vis-à-vis du glucose. Incubation 48h à 37°C Ouvert Milieu Hugh et Leifson + Glucose Ensemencement Virage de l’indicateur de pH au jaune dans tout le tube. Le milieu est devenu acide. Il y a eu production d’acides lors de l’utilisation du glucose par les bactéries en présence et en absence d’O2. Les bactéries sont fermentatives vis-à-vis du glucose. Virage au jaune dans les 2 tubes Fermé: (+ Huile de paraffine) 12

13 IV- Recherche de quelques enzymes
1- Recherche de la Coagulase 4 gouttes plasma de lapin oxalaté Incubation au Bain Marie à 37°C de 2 à 24h 4 gouttes de la suspension Coagulase - Coagulase + Suspension bactérienne en Bouillon Cœur Cervelle Exemple: S.epidermis: coagulase – S.aureus: coagulase + 13

14 2- Recherche de la Désoxyribonucléase : DNASE
ADN + H2O Nucléotides et/ou polynucléosides DNASE Absence d’un halot autour de la strie : DNASE - + Hcl sur toute la surface de la boite Staphylococcus epidermis Présence d’un halot clair autour de la strie: DNASE + Incubation 24h à 37°C Staphylococcus aureus 14

15 Présence d’une hémolysine (lyse hématies)
Test : On utilise une gélose au sang, on réalise une strie longitudinale. Résultat : Zone verdâtre autour de la strie : Hémolyse α Auréole claire autour de strie : Hémolyse  Aucune réaction : pas hémolyse

16 MILIEU CHAPMAN 1. Milieu d’isolement sélectif des bactéries du genre Staphylococcus (coques Gram + regroupés en amas(

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18 une gélose Chapman avec des colonies de Micrococcus, S
une gélose Chapman avec des colonies de Micrococcus, S. epidermidis et S. aureus

19 Milieu Baird parker : pour coagulase positive, il met en évidence la lécithinase et la lipoprotéinase Test : à partir d’une culture de 24h ensemencé les BP par strie (incuber 24h à 37°C) Résultat : -colonie noire : réduction du téllurite en téllure. - halo claire : présence de protéolyse -précipité blanc : hydrolyse des lécithines par lécithinase Les staphylocoques coagulase + sont lécithinase + et protéolyse+