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Intérêts de l’immunofluoresence et des méthodes moléculaires pour le diagnostic de pneumocystose
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Méthodes par coloration
MGG calcofluor Gomori-Grocott bleu de toluidine En particulier avec les prélèvements « pauvres » : expectorations ou patients non sidéens
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Immunofluorescence Lim, Applied microbiology , 1974
- 108 ech patients immunodéprimés clinique/radio suggérant PCP crachats induits ou aspirations tracheales IFD : Ac obtenus chez le lapin Clinique et/ou radio Nbre patients avec IFD + - total Très en faveur de PCP 25 10 35 Suggestifs de PCP 8 3 Négatifs (contrôles) 47 50
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(methenamine-silver sur biopsie)
Immunofluorescence Lim, Applied microbiology , 1974 Histologie (methenamine-silver sur biopsie) Nbre patients avec IFD + - total 9 2 4 6 11 15
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Immunofluorescence Lim, Applied microbiology , 1974
bonne spécificité de la technique : pas de confusion possible gain de sensibilité p/t à la méthode de référence de l’époque ? (anapath.)
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Immunofluorescence Milder, J. Clin. Microbiol. , 1980
rats immunodéprimés par injections sc de cortisone 2/semaines. sacrifice de 4 rats toutes les semaines * biopsie de poumon : Gomori-Grocott * LBA : Giemsa et IFI (Ac obtenus chez le lapin)
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Immunofluorescence Milder, J. Clin. Microbiol. , 1980
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Immunofluorescence Milder, J. Clin. Microbiol. , 1980
au moins aussi sensible que l’histologie pour le diagnostic très précoce de l’infection. sensibilité très supérieure au Giemsa sur LBA pas de problème de spécificité.
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Immunofluorescence Procop, J. Clin. Microbiol 2004
313 échantillons examinés (LBA ++). Diff-Quick, Gomori-Grocott, Calcofluor, Merifluor White® (IFD) - echantillon considéré + si positif avec 2 techniques au moins. technique Sensibilité Spécificité VPP VPN Diff-Quick 48.4 99.6 96.9 88.0 Calcofluor 73.8 98.0 93.4 Gomori 76.9 99.2 96.2 94.2 IFD 90.8 94.7 81.9 97.5
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Immunofluorescence Wolfson, J. Clin Microbiol, 1990 148 ech
double aveugle IFD : 100% Giemsa : 65% Aslanzadeh, Infection, 1996 168 ech CW : 57% Ng J. Clin Microbiol, 1990 182 ech (VIH ou « à risque ») IFI : 90 % DQ : 73 % Gomori : 72% Bleu toluidine : 71 % 163 ech IFD : 97 % DQ : 90 % Halford, Cytopathology, 1994 384 ech IFD : 86 % Gomori-Grocott : 66 %
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Immunofluorescence Elvin, BMJ, 1988 (abstract) 25 LBA VIH+ 43 IS VIH+
IFI : 19 + Gomori-Grocott : 17+ IF > Gomori Rigole, Pathol. Biol (abstract) 100 LBA ID IFD : 72 + Gomori-Grocott : 68 + Tuncer, Scand J Infect Dis (abstract) 30 IS ID IF : 8 + Giemsa et Gomori : 4 +
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Immunofluorescence Lautenschlager, J Clin Microbiol, 1996 553 LBA ID
IF : 86% Gomori-grocott : 81%
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Immunofluorescence Aslanzadeh, Infection, 1996 :
- 168 prélèvements respiratoires dont 58% VIH - IFD : 19+ dont 12 crachats, 1 crachat induit et 6 LBA (100%) CFW : 11+ dont 6 crachats et 5 LBA (57%) Gain de sensibilité avec l’IF notamment pour les expectorations.
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Immunofluorescence Cruciani Eur Respir J. 2002
- méta analyse : comparaison de l’analyse d’un crachat induit par rapport au LBA (« gold standard ») chez les VIH+. - colorations : 43 % IF : 67 % (p<0.001) L’IF est nettement plus sensible pour les crachats induits (VIH+).
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Immunofluorescence Kovacs, N. Engl. J. Med. 1988 (abstract)
49 crachats induits de patients présentant une PCP (confirmée a posteriori compte tenu des colorations, la clinique, l’évolution sous traitement) IFI : 92 % Bleu de toluidine : 80 % Diff-Quick : 76 %
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Immunofluorescence Ng J. Clin Microbiol, 1990 182 ech (VIH ou « à risque ») IFI : 90 % DQ : 73 % Gomori : 72% Bleu toluidine : 71 % Evaluation des FP avec l’IFI : 15 patients + uniquement avec IFI 3 patients PCP certaine (réponse au tt anti-Pj) 6 patients indéterminés 6 ont autre cause et n’ont pas été traités pour Pj Evaluation des FN avec toutes les méthodes : 77 patients – 57 Vrais négatifs 10 patients indéterminés 10 Faux négatifs (réponse au tt anti-Pj)
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Immunofluorescence Méthode Sensibilité Spécificité VPP VPN DQ 72 100
Ng J. Clin Microbiol, 1990 182 ech (VIH ou « à risque ») IFI : 90 % DQ : 73 % Gomori : 72% Bleu toluidine : 71 % Méthode Sensibilité Spécificité VPP VPN DQ 72 100 69 GMS 75 TBO 74 71 IFI 80 90 93
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Immunofluorescence Méthode Sensibilité Spécificité VPP VPN DQ 70-100
Ng J. Clin Microbiol, 1990 163 ech (VIH ou « à risque ») IFD : 97 % DQ : 90 % Méthode Sensibilité Spécificité VPP VPN DQ 70-100 65-100 IFD 72-100 100-96 100-92 69-100 (Crachats induits – LBA)
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Immunofluorescence difficulté de conclure en l’absence de « gold standard » IF : bonne sensibilité, a priori supérieure à celle des techniques de coloration classique. Permet de « rattraper » certains cas. Intéressant en particulier pour les expectorationns deux techniques sont indispensables. FN de toutes les techniques FP de l’IF décrite comme plus rapide d’execution (p/t Gomori) et surtout plus rapide et plus simple à lire. pas de problème de spécificité : Spécificité des Ac monoclonaux, et reconnaissance « facile » des kystes ?
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Immunofluorescence
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PCR Une capacité de détection supérieure …
Dilution des LBA : comparaison capacité de détection x 100 p/t Gomori (Ribes, J Clin Microbiol, 1997 ) x 1000 p/t IFD (Leigh et all, J Clin Pathol, 1993)
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PCR Une capacité de détection supérieure … Brancart,
J Microbiol Methods 2005 (abstract) 53 LBA Giemsa et IFD : 8+ PCR : 24+ Arcenas, Diag Microbiol Infect Dis (abstract) 2006 Gain de sensibilité de 21% Spécificité. Ribes J Clin Microbiol, 1997 129 ech Gomori : 37+ PCR : 60+ Caliendo, J Clin Microbiol, 1998 232 ech Crachats induits : IF : 64 % PCR : 96 % Leibovitz, J Clin Microbiol, 1995 284 ech Crachats induits : Giemsa et GMS : 28 % PCR : 85 %
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PCR Une capacité de détection supérieure … Khan, IF : 2+
J Infect, 2000 (abstract) 46 ech IF : 2+ PCR : 11+ nPCR : 21+ Tamburrini J Med Microbiol, 1993 (abstract) 52 LBA IFD : 81% PCR : 100%
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PCR Une capacité de détection supérieure … … pas toujours … Caliendo,
J Clin Microbiol, 1998 232 ech LBA : IF et PCR : 100 % Leibovitz, J Clin Microbiol, 1995 284 ech LBA : Giemsa et GMS : 82 % PCR : 86 %
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PCR Pourquoi PCR pas toujours à 100 % ?
Un certain nombre de Faux Neg de la PCR sont post-traitement. Leigh et all, J Clin Pathol, 1993 Mauvaise extraction de l’ADN Toutes les methodes ne se valent pas … (Lu, J Clin Microbiol, 1995) sensibilité de 6 méthodes PCR : 100%, 100%, 57%, 60%, 33%, 23%
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PCR Une trop grande sensibilité ?? Olsson,
Clin Microbiol Infect, 2001 91 ech IF : sens 60% spé 97% VPP 88% VPN 86% PCR : sens 96% spe 59% VPP 52% VPN 100%
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PCR (Maskell, Thorax, 2003 ; Medrano, Emerg Infect Dis, 2005 ;
Il existe un portage sain … Chez l’immunodéprimé : 18% (Maskell, Thorax, 2003) Chez l’immunocompétent : 12 à 20% (Maskell, Thorax, 2003 ; Medrano, Emerg Infect Dis, 2005 ; Sing, J Clin Microbiol, 2000) Pas toujours retrouvé : 0% (Nevez, Clin Infect Dis, 2005 ; Weig, J Clin Microbiol, 1997)
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PCR Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?
Flori, J Med Microbiol, 2004 173 LBA de patients présentant des signes évoquant PCP « Gold standard » : clinique, épreuve thérapeutique … sensibilité spécificité VPP VPN Giemsa Gomori 60 100 92 PCR RT PCR 85 21
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PCR Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?
Flori, J Med Microbiol, 2004 Détermination de la concentration en ADN dans l’échantillon : La PCR en temps réel, en permettant la quantification de l’ADN de l’échantillon pourrait permettre un diagnostic biologique fiable .
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PCR Les méthodes moléculaires ne sont pas à l’heure actuelle de bonnes méthodes pour le diagnostic de la PCP : trop de faux positifs dus à une trop grande capacité de détection. autres utilisation possible : épidémio, screening des patients pouvant bénéficier d’une prophylaxie, suivi de l’efficacité du tt …
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