L’Étude des Microorganismes

Présentation au sujet: "L’Étude des Microorganismes"— Transcription de la présentation:

1 L’Étude des Microorganismes
Microbiologie L’Étude des Microorganismes

2 Définition d’un Microorganisme
Dérivé du grec: Mikros, «petit» et Organismos, «organisme» Organisme microscopique qui comprend soit une seule cellule (unicellulaires) ou amas de cellules identiques (non différentiées) Ils comprennent les bactéries, les champignons, les algues, les virus, et les protozoaires

3 Travailler en Microbiologie
La Technique Stérile

4 Le Matériel Le matériel utilisé pour la culture et la manipulation de microorganismes doit être stérile et maintenu stérile Milieu de culture Éprouvettes Assiettes de Pétris Boucle d’ensemencement Etc.

5 Utiliser la technique stérile pour tous les transferts de microorganismes
Préviens la contamination de vos cultures Préviens la contamination de votre environnement Préviens la contamination de soi Toutes les bactéries sont des opportunistes

6 Transferts par la Technique Stérile
Stériliser la boucle d’ensemencement au bruleur Le fil entier doit devenir rouge Ne pas déposer sur la table! Laisser refroidir Boucle d’ensemencement

7 Transferts par la Technique Stérile
Retirer le capuchon avec le petit doigt de la main qui tient la boucle d’inoculation Ne pas déposer le capuchon sur la table! Enlever capuchon

8 Transferts par la Technique Stérile
Chauffer l’ouverture du tube au bruleur Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Garder l’ouverture du capuchon vers le bas Réchauffement de l’ouverture

9 Transferts par la Technique Stérile
Utiliser la boucle stérile pour retirer l’inoculum Liquide de bouillons Solide de géloses Solide de pentes Retirer l’inoculum

10 Transferts par la Technique Stérile
Chauffer l’ouverture du tube au bruleur encore une fois! Garder l’orientation du tube aussi prêt de l’horizontal que possible Réchauffement de l’ouverture

11 Transferts par la Technique Stérile
Remettre le capuchon sur la culture pure Retourner le tube au support à éprouvettes Refermer le tube

12 Transferts par la Technique Stérile
Inoculation Répéter les mêmes étapes pour inoculer le nouveau tube Retirer capuchon Chauffer l’ouverture Inoculer Fermer le tube

13 Microorganismes en Laboratoire
Les Milieux de Croissance

14 Buts Croissance sous des conditions contrôlées Maintien
Isolation de cultures pures Tests métaboliques

15 Types Liquides (bouillons) Milieux Solides
Permets la culture en suspension Distribution uniforme des éléments nutritifs, environnementaux et autres Permets la croissance de grands volumes Milieux Solides Mêmes que milieux liquides + agent de solidification L’agar : Polysaccharide dérivé d’une algue

16 La Croissance en Bouillon
Non-inoculé Limpide Turbide + sédiment Turbide Limpide + sédiment

17 Croissance sur Gélose Croissance sur surface solide Croissance isolée
Permets l’isolation de colonies simples Permets l’isolation de cultures pures Colonie simple

18 Milieux Solides (suite)
Pente Croissance en surface et en profondeur Différentes disponibilités d’oxygène Entreposage à long terme Tube profond Milieu semi-solide Entreposage à long terme Faible disponibilité d’oxygène

19 La Microscopie Les Colorations

20 Colorations Simples Coloration positive Colorations Négatives
Coloration du spécimen Coloration indépendante de l’espèce Colorations Négatives Coloration de l’environnement de fond

21 Méthodes Coloration simple: Un seul agent de coloration
Permet de déterminer la taille, la forme, et l’arrangement des cellules

22 Les Formes Cellulaires
Coccus: Sphères Division sur 1,2 ou 3 plans Nombre de plans de division donne différents arrangements Arrangements typiques de différents genres bactériens

23 Les Cocci (Coccus) Plans de division Arrangements Diplococcus
Streptococcus (4-20) Tétrade Staphylococcus

24 Les Formes Cellulaires (suite)
Bacilles: Bâtonnets Division sur 1 plan seulement Arrangements typiques de différents genres bactériens

25 Les Bacilles Plans de division Arrangements Diplobacille
Streptobacille

26 Quantifier les Microorganismes
Mesure de turbidité: densité optique Comptes viables Nombre le plus probable Comptes directs

27 Mesure de la Turbidité  Mesure la quantité de lumière qui peut traverser un échantillon Le moins de lumière qui traverse l’échantillon le plus dense est la population Mesure la densité optique ou le pourcentage de transmission

28 Mesure de la Turbidité Spectrophotomètre (A600):
Mesure de la Densité Optique Lumière 600nm Détecteur….lecture Lecture différente

29 2.0 1.0 D.O. 600nm % Transmission 100 50 Densité cellulaire

30 Comptes Viables Dilutions en séries de l’échantillon
Étalement des dilutions sur milieu approprié Chaque colonie simple est originaire d’une unité formatrice de colonie (UFC) Le nombre de colonies équivaut à une approximation du nombre de bactéries vivantes dans l’échantillon

31 63 UFC/0. 1 ml de 10-5 630 UFC/1. 0 ml de 10-5 630 UFC/ml X 105 = 6
63 UFC/0.1 ml de UFC/1.0 ml de UFC/ml X 105 = 6.3 x 107/ml dans l’échantillon original

32 = Avantages: Limites: Dénombre les microorganismes viables
Peu distinguer différents microorganismes Limites: Pas de milieu universel Nécessite la croissance du microorganisme UFC une bactérie Ex. Un UFC de Streptococcus  un de E.coli = ?