LES COLIFORMES ET LES STREPTOCOQUES FECAUX

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1 LES COLIFORMES ET LES STREPTOCOQUES FECAUX
Sous-titre

2 DENOMBREMENT DES COLIFORMES ET DES STREPTOCOQUES FECAUX
TP D”ANALYSE MICROBIOLOGIQUE Présenté par Mme SAFAR ZITOUN Djazia

3 DENOMBREMENT DES COLIFORMES SUR MILIEU SOLIDE
 Gélose lactosée au désoxycholate 0.1% Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire (analyse des eaux et des aliments). Mode d’ensemencement Sélectivité / composition Caractères recherchés Résultats  Isolement 2 inhibiteurs des bactéries Gram+ à faible concentration : - le désoxycholate (sels biliaires) - le citrate de sodium. le lactose Colonies rouges : bactéries lactose+ , coliformesColonies incolores : bactéries lactose- Aspect du milieu avant utilisation Mode d’ensemencement Sélectivité / composition Caractères recherchés Résultats AVANT APRES

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5 Gélose VRBL DOMAINE D’UTILISATION
La gélose lactosée biliée au cristal violet et au rouge neutre (VRBL) est un milieu sélectif utilisé pour les recherche et dénombrement des coliformes dans l’eau, le lait, les produits laitiers et les autres produits alimentaires.

6 La présence simultanée de cristal violet et de sels biliaires assure l’inhibition des bactéries à
Gram positif. - La fermentation du lactose se traduit par une acidification, révélée par le virage au rouge de l’indicateur pH (rouge neutre), et par la précipitation d’acides biliaires autour des colonies. Les coliformes présentent des colonies violacées de diamètre égal ou supérieur à 0,5 mm après 24 heures d’incubation. Les entérobactéries lactose-négatif sont incolores.

7 Bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB)
DOMAINE D’UTILISATION Le bouillon lactosé bilié au vert brillant est utilisé pour les recherche et dénombrement des coliformes, des coliformes thermotolérants et d’Escherichia coli (Test de Mackenzie) dans le lait, les produits laitiers et les autres produits alimentaires, les eaux d’alimentation et les eaux résiduaires.

8 La présence simultanée de bile de bœuf et de vert brillant provoque l’inhibition de la presque
totalité des microorganismes à Gram-positif et des bactéries à Gram-négatif autres que les coliformes. - La teneur en vert brillant est spécialement déterminée afin d’empêcher la croissance des anaérobies fermentant le lactose à 44°C, ce qui évite l’obtention de résultats faussement positifs. - Le développement des coliformes se manifeste par l’apparition d’une turbidité, associée à une production de gaz dans la cloche de Durham par suite de la fermentation du lactose.

9 Confirmation d’Escherichia coli
A partir des tubes contenant le milieu d’enrichissement sélectif ayant donné un dégagement gazeux après incubation, ensemencer après un second passage sur un autre milieu d’enrichissement sélectif et une nouvelle incubation, une série de tubes contenant de l’eau peptonée. L’ensemencement s’effectue à l’öse dans le milieu préalablement chauffé à 45°C. Incuber à 45°C pendant 24 à 48 heures et examiner cette série de tubes pour la production d’indole. Ajouter 0,5 ml de réactif de Kovacs pour la recherche de l’indole, bien mélanger et examiner pendant 1 minute. Pour chaque dilution, compter le nombre de tubes ayant une couleur rouge de la phase alcoolique indiquant la présence d’indole (tubes positifs)