Procédure d'identification bactérienne

Présentation au sujet: "Procédure d'identification bactérienne"— Transcription de la présentation:

1 Procédure d'identification bactérienne
Partie 1 : Préparation de la galerie miniaturisée

2 Materials avaliable Tube d’eau physiologique 5mL Eau distillée Huile
Gélose Galerie API avec boite Pipette non stérile Pipettes stériles

3 1. Préparation de la suspension

4 Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen
1.1. Prélever une colonie sur la gélose avec une anse stérile. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

5 Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen
1.2. Faire une suspension avec ces bactéries. Introduire l’anse dans un tube d’eau physiologique stérile de 5 mL. Dans l’eau, frotter l’anse sur la paroi du tube, pour disperser les bactéries. Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

6 S 1.3. Homogénéiser le tube par rotation manuelle, puis noter « S » sur le tube.

7 2. Préparation de la galerie API

8 2.1. Remplir le fond de la boite avec de l’eau distillée de façon à recouvrir l’ensemble des cavités . 2.2. Effectuer un mouvement de rotation du fond de boite pour bien répartir l’eau, puis aspirer l’excédent avec une pipette non stérile.

9 2.3. A l’aide d’une pince, placer la galerie dans le fond de la boite.
2.4. Poser le couvercle et identifier votre galerie : noter le numéro de votre poste sur la languette plastique du fond de boite.

10 2. Ensemencement de la galerie API

11 Introduction Cupule Microtube Exemples : Test non souligné
Test souligné Test encadré

12 3.1. Ouvrir le couvercle et l’utiliser comme support pour poser la boite de galerie de façon inclinée.

13 Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen
3.2 Homogénéiser votre suspension par rotation puis prélever environ 2 mL de suspension « S » à l’aide d’une pipette stérile. S Attention: le prélèvement est réalisé en asepsie autour du bac Bunsen

14 pour un test encadré (exemple CIT), remplir le microtube et la cupule.
3.3 Remplir chaque test avec la suspension en respectant les consignes suivantes : Pour un test souligné ou non souligné (exemple : ONPG ou ADH), remplir seulement le microtube, pour un test encadré (exemple CIT), remplir le microtube et la cupule. Cupule microtube

15 3.4 Avec une pipette stérile, ajouter de l’huile dans les cupules des 5 tests soulignés (ADH, LDC, ODC, H2S, URE). Cupule

16 3.5 Refermer le couvercle et incuber à 37°C pendant 16h minimum.
Galerie API dans l’étuve

17 4. Lecture des résultats Le deuxième jour, après incubation, identifier votre bactérie (partie 2).